Werkingsprincipe van fluorescentiemicroscoop (met figuur)

Lees dit artikel om meer te weten te komen over de werking van fluorescentiemicroscopen!

Werkend principe:

Veel stoffen absorberen licht. Sommige stralen echter, na licht van een bepaalde golflengte en energie te hebben geabsorbeerd, licht uit met een langere golflengte en mindere energie.

Dergelijke stoffen worden 'fluorescerende stoffen' genoemd.

Toepassing van dit fenomeen is de basis van de fluorescentiemicroscoop. In de praktijk worden microben gekleurd met een fluorescerende kleurstof en vervolgens belicht met blauw licht. De kleurstof absorbeert blauw licht (kortere golflengte) en zendt groen licht uit (langere golflengte).

In een fluorescentiemicroscoop wordt een kwikbooglamp met een hoge intensiteit gebruikt als de lichtbron (figuur 4.11). Het straalt wit licht uit, dat door een 'exciterfilter' wordt gevoerd. Het maakt alleen de blauwe component van het witte licht mogelijk (het witte licht bestaat uit zeven kleuren, die in de afnemende volgorde van de golflengte violet, indigo, blauw, groen, geel, oranje en rood zijn) om er doorheen te gaan en blokkeert alle andere kleur componenten.

Een dichroïsche spiegel die blauw licht weerkaatst, maar groen licht op het pad van het blauwe licht gebruikt. De spiegel is gefixeerd op een zodanige hoek dat het blauwe licht naar beneden wordt gereflecteerd naar het monster.

Het specimen is eerder gekleurd met een fluorescerende kleurstof, zoals acridine oranje NO, acridine geel, acriflavine, thioflavine S, thioflavine T of titaan geel G. Bepaalde delen van het monster behouden de kleurstof, terwijl andere dat niet doen. De delen, die de fluorescente kleurstof vasthouden, absorberen blauw licht en zenden groen licht uit. Het uitgestraalde groene licht gaat omhoog en passeert de dichroïsche spiegel. Het reflecteert blauw licht, indien aanwezig, en laat alleen groen licht door.

Vervolgens bereikt het licht een 'barrièrefilter'. Het laat groen licht door naar het oog en blokkeert het resterende blauwe licht van het monster, dat mogelijk niet volledig is weerkaatst door de dichroïsche spiegel.

Aldus neemt het oog de gekleurde delen van het specimen op als een gloeiend groen voorwerp tegen een gitzwarte achtergrond, terwijl de niet-gekleurde delen van het specimen onzichtbaar blijven.