Immunofluorescentie gebruikt voor detectie van antigenen in cellen
Immunofluorescentie gebruikt voor detectie van antigenen in cellen!
Fluorescerende verbindingen als immunochemisch voor het detecteren van antigenen in weefsels werden geïntroduceerd door Coons (1941).
Immunofluorescentie wordt gebruikt voor de detectie van antigenen in cellen of weefsels (met behulp van bekende antilichamen) evenals detectie van antilichamen in serum (met behulp van bekende antigenen). Fluorescentie is de emissie van licht van één kleur wanneer de stof wordt blootgesteld aan een licht van een andere kleur. Wanneer een fluorescerende stof wordt geëxciteerd met een licht met een bepaalde golflengte, absorbeert deze het licht en zendt een licht uit met een andere golflengte.
ik. Fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC) heeft een absorptiemaximum van licht bij 490-495 nm en emitteert het licht bij 530 nm (groene kleur).
ii. Tetramethyl rhodamine isothiocyanaat heeft een absorptiemaximum van licht bij 550 nm en geeft roodkleurenlicht (580 nm) af.
een. Directe immunofluorescentie:
Deze techniek wordt gebruikt om antigenen in cellen of weefsels te detecteren.
Het weefsel, dat onbekend antigeen heeft, is bevestigd aan een glasplaatje.
↓
Bekend antiserum (specifiek voor het antigeen van belang) geconjugeerd met FIT (bekend als conjugaat) wordt op het weefsel aangebracht en geïncubeerd.
ik. Als het antigeen van belang in de weefsels is, bindt het conjugaat aan het antigeen.
↓
Vervolgens wordt de schuif gewassen om het ongebonden conjugaat te verwijderen.
↓
De dia wordt vervolgens bekeken onder een fluorescentiemicroscoop.
ik. Helder groene kleur zal worden gezien als er antigeen in het weefsel is.
ii. Als er geen antigeen in het weefsel aanwezig is, zou al het conjugaat zijn gewassen tijdens de wasstap en bijgevolg is er geen groene kleur.
Deze techniek wordt ook gebruikt om de aanwezigheid van bacteriële of virale antigenen in geïnfecteerde weefsels te detecteren.
b. Indirecte immunofluorescentie:
Deze techniek wordt gebruikt om antilichamen in het serum te detecteren.
Cellen die bekende antigenen bevatten worden gefixeerd op glasplaatje.
↓
Het testserum wordt over het glaasje toegevoegd en geïncubeerd.
ik. Als er antilichamen (tegen de antigenen in cellen) in het serum zijn, zullen de antilichamen in cellen aan de antigenen binden.
↓
Vervolgens wordt het plaatje gewassen om de ongebonden serumcomponenten te verwijderen.
↓
Anti-humaan immunoglobuline geconjugeerd met FITC wordt toegevoegd en geïncubeerd.
ik. Het FITC-geconjugeerde anti-humane immunoglobuline zal binden aan de serum-antilichamen gebonden aan de celantigenen.
↓
Na het wassen wordt de dia bekeken onder een fluorescentiemicroscoop.
ik. Aanwezigheid van felgroene kleur geeft aan dat het serum antilichamen tegen de antigenen in de cellen heeft.
ii. Afwezigheid van groene kleur geeft de afwezigheid van serum-antilichamen tegen de antigenen in de gebruikte cellen aan.
