Hoe Capsule-kleuring van een bacterie uit te voeren

Richt op capsulekleuring van bacteriën om de bacteriële capsule waar te nemen.

Doel:

In sommige bacteriën is de celwand omgeven door een visceuze celenvelop die 'capsule' wordt genoemd. Het is gemaakt van polysaccharide, glycoproteïne of polypeptide.

Wanneer de capsule te dun is om te worden waargenomen onder een lichtmicroscoop, wordt deze 'microcapsule' genoemd en wanneer deze zo dik is dat veel cellen zijn ingebed in de capsulaire matrix; het wordt 'slijm' genoemd.

Op basis van de aanwezigheid of afwezigheid van een capsule, zijn bacteriën als volgt van twee soorten:

(1) Capsulated Bacteria:

Een bacterie, die een capsule heeft, is een gekapselde bacterie.

(2) Niet-ingekapselde bacteriën:

Een bacterie, die geen capsule heeft, is een niet-ingekapselde bacterie

Het doel van capsulekleuring is om de bacteriële capsule waar te nemen door kapselmateriaal van de bacteriecel te onderscheiden.

Beginsel:

Bij capsulekleuring wordt een uitstrijkje van bacteriën in het midden van een glaasje gemaakt. Het is niet thermisch gefixeerd, omdat de celinkrimping veroorzaakt door verwarming een heldere zone rond de cel kan creëren, die als een capsule kan worden aangezien.

Bovendien, aangezien het kapselmateriaal in water oplosbaar is en met krachtig wassen kan worden weggespoeld, worden slechts twee reagens gebruikt bij kleuring zonder enige tussentijdse wassing met water. Een van de twee reagentia is de primaire vlek, kristalviolet. Het verleent een donker paarsblauwe kleur aan zowel de cel als de capsule.

Het wordt echter 'geabsorbeerd' in de cel vanwege de ionische aard van de cellulaire componenten, terwijl het zich eenvoudig 'vasthecht' aan de capsule, vanwege de niet-ionische aard van het kapselmateriaal. Om te voorkomen dat het kapselmateriaal losraakt, wordt het uitstrijkje niet met water gewassen.

Het tweede reagens, kopersulfaat fungeert zowel als een ontkleurende stof als een tegenkleuring. Het ontkleurt door overtollig kristalviolet uit de cellen te verwijderen, evenals het kristalviolet dat aan de capsule kleeft. Het werkt ook de capsule tegen en geeft het een lichtblauwe kleur. De capsule verschijnt nu lichtblauw, terwijl de cel diep paars-blauw lijkt.

Vereiste materialen:

Dia, lus, immersieolie, microscoop, kristalvioletbeits, kopersulfaatoplossing (20%).

Procedure:

1. De schuif wordt goed schoongemaakt onder leidingwater, zodat water niet als druppels op het oppervlak achterblijft (Figuur 5.14).

2. Het aanhangende water wordt weggevaagd met absorberend papier en de dia wordt aan de lucht gedroogd.

3. Een uitstrijkje van bacteriën wordt als volgt in het midden van de schuif op twee manieren voorbereid.

(een) Als op agarplaat of agarhoek gekweekte bacteriën worden waargenomen, wordt een druppel water in het midden van de schuif geplaatst en een lus van bacteriën van de plaat of helling wordt er door een met lus gesteriliseerde vlam overgebracht. Vervolgens, door langzame rotatie van de lus in de druppel, wordt een suspensie van bacteriën gemaakt en deze wordt uitgespreid tot een uitstrijkje wordt verkregen.

(B) Als in vloeibare bouillon gekweekte bacteriën moeten worden waargenomen, wordt een druppel van de bacteriesuspensie direct in het midden van de schuif geplaatst door een vlamgesteriliseerde lus en wordt een uitstrijkje gemaakt door spreiding.

4. Het uitstrijkje is aan de lucht gedroogd. Er wordt geen warmte gefixeerd omdat de resulterende celkrimp een duidelijke zone rond de bacteriën kan creëren, die als een capsule kan worden aangezien.

5. De uitstrijk wordt overspoeld met de primaire vlek, kristalviolet, gedurende 5-7 minuten.

6. Het uitstrijkje wordt gewassen met 20% kopersulfaatoplossing. Om te voorkomen dat het kapselmateriaal losraakt, wordt het uitstrijkje niet met water gewassen.

7. De dia is droog geblazen met absorberend papier.

8. De dia wordt op het microscoopstadium geknipt en het uitstrijkje wordt waargenomen bij een laag energieverbruik en hoge droge doelen.

9. Een druppel onderdompelingsolie wordt op het uitstrijkje aangebracht.

10. Het uitstrijkje wordt waargenomen onder het object van olie-immersie.

opmerkingen:

1. Kleur van het gebied rond de cellen:

Lichtblauw: capsule aanwezig (gekapselde bacteriën)

Donker paars-blauw: capsule afwezig (niet-ingesloten bacteriën)

2. Kleur van de cellen:

Donker paars-blauw

3. Indien capsulated, grootte van de capsules:

Klein, middelmatig of groot.

4. Relatieve grootte van cellen en capsules:

Maak met behulp van het oog een tekening van het veld onder het olie-immersieobjectief, met vermelding van de relatieve grootte van de cellen en de capsules.