Verschillende chemicaliën en media gebruikt in een microbiologisch laboratorium

Verschillende chemicaliën en media gebruikt in een laboratorium voor microbiologie!

In het laboratorium worden bacteriën gekweekt op voedselrijke stoffen die 'media' worden genoemd. Een verscheidenheid aan media is ook vereist voor specifieke toepassingen.

De componenten van de media worden in een bepaalde verhouding gewogen, in de vereiste hoeveelheid water gemengd en in een autoclaaf gesteriliseerd. Bacteriën worden erin geïnoculeerd en kunnen groeien.

Het wegen van de ingrediënten van media is een vervelende klus en sommige ingrediënten kunnen onbewust worden gemist. Om deze moeilijkheid te ondervangen, zijn nu kant-en-klare media in poedervorm beschikbaar.

Deze media bevatten alle ingrediënten in de voorgeschreven verhoudingen. Tot een bepaalde hoeveelheid van de poedermedia (zoals vermeld op het etiket van de verpakking) wordt een gespecificeerde hoeveelheid water toegevoegd en gesteriliseerd.

Kweekmedia zijn van de volgende soorten:

I. Chemisch gedefinieerde media:

Chemisch gedefinieerde media of synthetische media zijn de media, waarin alle specifieke chemicaliën (moleculen en atomen) en hun concentraties kunnen worden bepaald. De chemicaliën kunnen H20, NaCl, Na2S04, KCI en agar omvatten. Voorbeelden: anorganische synthetische bouillon, glucose zout bouillon.

II. Complexe media:

Complexe media zijn de media, waarin alle specifieke chemicaliën (moleculen en atomen) en hun concentraties niet kunnen worden bepaald. Voor kieskeurige bacteriën worden in de media weinig complexe stoffen gebruikt, zoals rundvleesextract, gistextract en pepton, waarvan de exacte chemische samenstelling (moleculen en atomen) aanzienlijk varieert en niet bekend is. Deze media worden voornamelijk gebruikt voor de overvloedige groei van bacteriën. Voorbeelden: voedingsbodem en voedingsagar.

III. Gespecialiseerde media:

Deze media worden gebruikt voor specifieke doeleinden, in plaats van alleen voor de groei van bacteriën.

Op basis van het gebruiksdoel zijn deze van de volgende typen:

1. Selectieve media:

Het zijn de media die een specifieke samenstelling van ingrediënten bevatten, die de groei van sommige doelwitbacteriën ondersteunt en de groei van de andere remt. Ze worden gebruikt om specifieke groepen bacteriën te isoleren.

Wanneer een bepaalde groep bacteriën groeit in een selectief medium, manifesteert het typische koloniekarakteristieken, die helpen bij de detectie en opsomming ervan in verschillende monsters. De specifieke bacteriën van interesse, gevonden als geïsoleerde kolonies worden genomen voor verdere tests voor bevestigde identificatie. Soms worden selectieve media ook gebruikt als differentiële media.

De voorbeelden van selectieve media worden hieronder gegeven:

(a) MacConkey Agar:

Het wordt gebruikt om gram-negatieve soorten bacteriën te laten groeien. Het kristalviolet dat in het medium wordt gebruikt, remt de groei van gram-positieve bacteriën, terwijl gram-negatieve soorten kunnen groeien.

(b) EMB Agar:

Eosine methyleenblauwe agar (EMB-agar) wordt gebruikt om gramnegatieve soorten bacteriën te laten groeien. Het remt de groei van gram-positieve bacteriën gedeeltelijk, waardoor de gramnegatieve bacteriesoorten er overvloediger in groeien. Het wordt ook gebruikt bij de identificatie van de enterische coli uit Escherichia coli, die erop groeit als blauwzwarte kolonies met een metaalachtige groene glans.

Andere enterische coliformen, zoals Enterobacter aerogenes, groeien er op als dikke, mucoïde, roze kolonies. Naast deze lactose-fomenters groeien er ook lactose-non-fomenters op, maar als kleurloze kolonies, waarvoor ze de paarse kleur van het medium aannemen.

(c) Mannitolzoutagar:

Het wordt gebruikt voor het laten groeien van Staphylococcus spp. De hoge zoutconcentratie (7, 5% NaCl) die in het medium aanwezig is, remt de groei van de meeste andere bacteriën. Het onderscheidt ook Staphylococcus in mannitol-fermenterende Staphylococcus, die groeit met gele zones rondom de kolonies en mannitol-niet-fermenterende Staphylococcus, die groeit zonder verandering in kleuring.

2. Differentiële media:

Ze zijn de media, waarop verschillende bacteriën groeien als kolonies, met verschillende visuele kenmerken.

De voorbeelden van differentiële media worden hieronder gegeven:

(a) MacConkey Agar:

Op dit medium groeien de niet-pathogene normale darmbacteriën, die lactose-fermentors zijn, als rode kolonies, terwijl de pathogene darmbacteriën, die lactose-non-fermentors zijn, als kleurloze kolonies groeien.

(b) Blood Agar:

Bloed is het belangrijke bestanddeel van dit medium. Het is een verrijkingrediënt voor de veeleisende bacteriën zoals Streptococcus spp.

Het wordt gebruikt om de eigenschappen van streptokokken te differentiëren om verschillende soorten hemolyse van bloed te produceren als volgt:

(i) α-hemolyse:

Hier vindt gedeeltelijke vernietiging van RBC plaats, resulterend in groene kleurzones rond kolonies als gevolg van de reductie van hemoglobine tot methemoglobine.

(ii) β-hemolyse:

Hier vindt volledige hemolyse van RBC plaats, wat resulteert in een duidelijke zone rond kolonies. Deze hemolyse brengt twee soorten hemolysinen teweeg, namelijk 'streptolysine O', een antigeen zuurstoflabiel enzym en 'streptolysine S', dat een niet-antigeen zuurstofstabiel lysine is.

(iii) y-hemolyse:

Hier vindt geen hemolyse plaats, wat resulteert in geen zone rond kolonies.

3. Transportmedia:

Het zijn media die worden gebruikt voor het korte transport van bacteriën, waarbij groei ongewenst is. Dergelijke media bevatten alleen buffer en zout. De media bevatten geen enkele bron van C, N en andere groeifactoren. Het voorkomt microbiële groei.

4. Verrijkingsmedia:

Het zijn de media, waarin het relatieve aandeel van de doelbacteriën is verrijkt, omdat ze de voedingsstoffen voor de doelbacteriën bevatten, terwijl geen andere voor de anderen. Ontlasting bevat bijvoorbeeld een zeer laag aantal Salmonella en Shigella.

Om ze te isoleren, worden ze eerst gekweekt in selenietbouillon of GN (gramnegatieve) bouillon, waarin alleen Salmonella en Shigella overvloedig zullen groeien, terwijl anderen niet zullen groeien en in de lagfase zullen blijven. Vervolgens wordt dit uitgestreken op vaste media om kolonies Salmonella en Shigella te verkrijgen.

5. Verrijkte media:

Ze zijn de media die worden gebruikt om de groei van maximale soorten bacteriën te ondersteunen.

6. Biochemische media:

Deze media worden gebruikt voor het testen van biochemische activiteiten van bacteriën, die helpen bij hun identificatie. Een lijst van belangrijke biochemische media die worden gebruikt in de biochemische tests die worden uitgevoerd voor de identificatie van verschillende bacteriën wordt hieronder gegeven.