In dole test om het vermogen van bacteriën te vinden om het aminozuur tryptofaan te hydrolyseren (met figuur)

In test om het vermogen van bacteriën te vinden om het aminozuur te trypen Tryptofaan!

Beginsel:

Sommige bacteriën hebben het vermogen om het aminozuur tryptofaan te hydrolyseren tot indol, omdat ze het enzym 'tryptofanase' kunnen produceren.

Tryptofaan wordt gehydrolyseerd met de productie van indool, pyrodruivenzuur en ammoniak. Indool wordt gedetecteerd door het kleurreagens, paradimethylaminobenzaldehyde (p-DMAB, dwz Kovac's reagens), dat een roze ring produceert. Indool reageert met p-DMAB om de quinoïdale roodviolette verbinding (rosindolkleurstof) van de verbinding te produceren, die roze van kleur is. De ring wordt aan de oppervlakte geproduceerd, omdat het reagens wordt bereid in amylalcohol.

Bij de indooltest worden de testbacteriën gekweekt in een medium dat tryptofaan bevat. Als de bacterie het vermogen heeft om tryptofaan te hydrolyseren tot indol, wordt een roze ring gevormd aan het oppervlak van de bouillonkweek na toevoeging van p-DMAB.

Vereiste materialen:

Reageerbuizen, erlenmeyer, wattenstaafjes, entdraad, autoclaaf, bunsenbrander, laminaire stromingskamer, wegwerpkruik, incubator, trypton bouillon, Kovac's reagens (paradimethylaminobenzaldehyde), geïsoleerde kolonies of zuivere culturen van bacteriën.

Procedure:

1. De ingrediënten van tryptonbouillonmedium of het kant-en-klare poeder dat vereist is voor 100 ml bouillon worden afgewogen en opgelost in 100 ml gedestilleerd water in een erlenmeyer van 250 ml door schudden en zwenken. Tryptone fungeert als een bron van tryptofaan. Daarom is toevoeging van tryptofaan aan de bouillon optioneel (Figuur 7.3).

2. De pH wordt bepaald met behulp van een pH-papier of pH-meter en bijgesteld tot 7, 5 met 0, 1 N HC1 als het meer is of met 0, 1 N NaOH als het minder is. De kolf wordt, indien nodig, verwarmd om de ingrediënten volledig op te lossen.

3. De bouillon wordt verdeeld in vijf reageerbuizen (elk ongeveer 5 ml), met katoen bedekt, bedekt met ambachtelijk papier en met draad of rubberen band gebonden.

4. De bouillonbuizen worden gedurende 15 minuten bij 121 ° C (15 psi druk) in een autoclaaf gesteriliseerd.

5. De bouillonbuizen mogen afkoelen tot kamertemperatuur.

6. De testbacteriën worden aseptisch geïnoculeerd, bij voorkeur in een laminaire stroomkamer, in de bouillon met behulp van een entcuvus die is gesteriliseerd over bunsenvlam. De lus wordt gesteriliseerd na elke inoculatie.

7. De geïnoculeerde bouillonbuizen worden 48 uur bij 37 ° C geïncubeerd in een incubator.

8. Het kleurreagens, para-dimethylaminobenzaldehyde (p-DMAB), (dwz Kovac's reagens) wordt in de bouillonbuizen (0, 5 ml elk) gedruppeld en na 1 minuut geobserveerd.

Alternatief:

7. In oxaalzuur gedrenkte papieren stroken worden in de mond van de geënte bouillonbuizen geplaatst, zodat ongeveer de helft van de papierstroken in de buizen achterblijft zonder de bouillon aan te raken en de andere helft aan de buitenkant. Hiervoor wordt filtreerpapier gesneden in stroken van ongeveer 35 mm lang en 5 mm breed. De stroken worden gedrenkt in een warme verzadigde waterige oplossing van oxaalzuur en vóór gebruik gedroogd.

8. De geënte bouillonbuizen worden 48 uur geïncubeerd bij 37 ° C in een incubator.