Immunohistochemische testtechnieken voor het detecteren van tumor-antigenen
Immunohistochemische assays worden veelvuldig gebruikt om tumorantigenen te detecteren en om lymfocytcelsoorten in chirurgische pathologiesecties te classificeren.
Het weefselspecimen wordt op een glasplaatje bevestigd.
↓
Enzym-gelabeld mAb (conjugaat) wordt over het monster gelaagd en geïncubeerd.
ik. Als het specimen specifiek antigeen tegen het mAb heeft, bindt het conjugaat aan het antigeen op het specimen.
↓
Na het wassen wordt substraat toegevoegd en geïncubeerd.
ik. Ontwikkeling van kleur geeft aan dat specifiek antigeen tegen het mAb aanwezig is in de weefselsectie.
ii. Bij afwezigheid van specifiek antigeen is er geen kleurontwikkeling.
↓
De schuif wordt gewassen en de weefselsectie wordt onder de microscoop op de aanwezigheid van kleur waargenomen.
Mierikswortelperoxidase (HRP) is het enzym dat gewoonlijk wordt gebruikt in de immunohistochemische technieken. Het substraat voor HRP is waterstofperoxide en diamino-benzidine. De reactie van HRP met diaminobenzidine produceert een zwarte kleur.
Peroxidase-antiperoxidase (PAP) is een andere methode die wordt gebruikt in chirurgische pathologie om enzymen en tumor-gerelateerde antigenen te detecteren.
Het is een driestaps-methode:
Stap 1:
Het weefsel waarvan wordt vermoed dat het een bepaald antigeen heeft, wordt op een glasplaat gefixeerd.
↓
Bekend konijnenantilichaam tegen het betreffende antigeen wordt op het weefsel (waarvan wordt vermoed dat het het antigeen bevat) op een glasplaatje bevestigd.
ik. Als het overeenkomstige antigeen zich toevallig in het weefsel bevindt, bindt het antilichaam daaraan. Het glaasje wordt gewassen na incubatie.
↓
Stap 2:
Anti-konijn immunoglobuline (link-antilichaam genoemd) valt op de glaasje.
ik. Als het eerste konijnantilichaam zich toevallig in de glaasje bevindt (gebonden aan het antigeen) bindt het anti-konijnimmunoglobuline aan het konijnenantilichaam. Na incubatie wordt de glaasje gewassen.
↓
Stappen 3:
Een immuuncomplex, bestaande uit antilichamen van konijnen tegen peroxidase, gecombineerd met peroxidase, valt weg. Dit konijnenantilichaam zal binden aan het anti-konijn immunoglobine (koppelingsantilichaam-stap 2) door zijn Fc-gebied. Na incubatie wordt de glaasje gewassen.
↓
Ten slotte wordt peroxidasesubstraat toegevoegd. Het substraat zal reageren met peroxidase, wat resulteert in de vorming van een gekleurd product dat onder een microscoop wordt waargenomen.
ik. Aanwezigheid van het gekleurde product op het weefsel geeft de aanwezigheid van het overeenkomstige antigeen aan.
ii. Afwezigheid van het gekleurde product op de plaat geeft aan dat het betreffende antigeen afwezig is in het weefsel.
