Immunodiffusie van antigeen of antilichamen

Immunodiffusie van antigeen of antilichamen!

Immunodiffusie verwijst naar de beweging van antigeen of antilichaam of zowel antigeen- als antilichaammoleculen in een dragermedium door diffusie.

Het antigeen en antilichaam binden met elkaar en vormen onoplosbaar immunoprecipitaat, dat zichtbaar is voor het blote oog als precipiterende band of lijn. J. Oudin beschreef een systeem van enkelvoudige diffusie van antigeen en antilichaam in met agar gevulde buizen.

Al snel beschreef Ouchterlony dubbele diffusie in agar, gelaagd op dia's. Beweging wordt ook beschreven als lineair of radiaal. De immunodiffusiemethoden worden gebruikt voor kwalitatieve en kwantitatieve analyse van serumeiwitten. Echter, meer gevoelige en specifieke methoden zoals enzymgekoppelde immunoabsorptie assays (ELISA) en radio-immunoassay (RIA) hebben de immunodiffusiemethoden bijna vervangen.

Enkele immunodiffusie:

Ofwel antigeen of antilichaam blijft gefixeerd en de andere reactant beweegt (diffusietechniek van Oudin).

Dubbele immunodiffusie:

Zowel het antigeen als het antilichaam zijn vrij om naar elkaar toe te bewegen. (Ouchterlony-techniek).

Gesmolten agar wordt gegoten op glasplaatje of petridish en laat stollen. Twee kleine putjes op enkele millimeter afstand van elkaar worden uitgestanst. Antigeen en overeenkomstige antilichaamoplossingen worden in tegenovergestelde putjes gedruppeld. De glijbaan / petridish wordt vervolgens gedurende 18-24 uur in een vochtige kamer bewaard. Het antigeen en antilichaam bewegen door de agar en combineren om een ​​antigeen-antilichaamcomplex te vormen. Het antigeen-antilichaamcomplex is zichtbaar als een precipitatielijn.

Dubbele diffusie wordt ook uitgevoerd door het plaatsen van antigeen- en antilichaamputjes onder verschillende hoeken voor vergelijkingsdoeleinden. De drie patronen van deze reacties worden getoond in Figuur 27.2.

ik. Reactie van identiteit:

Antigenen in twee putjes zijn identiek (Agl en Ag2). Dus de reactie met het antilichaam resulteert in precies dezelfde precipitinelijnen. De neerslaglijnen steken niet over, maar vormen een ononderbroken lijn. Fusie van de twee precipitine-lijnen geeft aan dat het antilichaam reageert met epitopen die gewoonlijk aanwezig zijn op de twee antigenen.

ii. Reactie van niet-identiteit:

Twee niet-identieke antigenen (Agl en Ag3) bevinden zich in de antigeenputjes, terwijl het antilichaam goed antilichamen tegen beide antigenen heeft. De twee gevormde antigeen-antilichaam precipitinelijnen verschillen van elkaar. Vandaar dat de twee neerslaglijnen elkaar volledig kruisen (snijden).

iii. Reactie van gedeeltelijke identiteit:

De antigene determinanten in de antigenen van twee putjes worden gedeeltelijk gedeeld (Agl en Agla). Vandaar dat het antilichaam reageert met zowel de antigenen en vormen vormt die geen volledig kruis vormen. De neerslaglijn kruist in slechts één richting. De verlengde precipitinlijn wordt een spoor genoemd. Het spoor geeft aan dat het antilichaam ook een extra epitoop precipiteert dat niet aanwezig is in een van de antigenen.

Dubbele immunodiffusie kan ook worden gebruikt voor semi-kwantitatieve analyse van antigeen of antilichaam (figuur 27.3):

Fig. 27.3:

Dubbele immunodiffusie voor semi-kwantitatieve analyse van antigeen. Antilichaam wordt in de centrale put geplaatst en antigeen wordt in verschillende concentraties in de perifere putjes geplaatst

ik. Kwantificering van antigeen:

Het antigeen X wordt serieel verdund en in de putjes geplaatst die een centrale put omgeven waarin anti-X-antilichaam wordt geplaatst. Het antigeen en antilichaam diffunderen uit de putjes en reageren met elkaar, resulterend in de vorming van precipitine-lijnen tussen de antigeen- en antilichaamputjes. De hoeveelheid antigeen-antilichaam-neerslag neemt af met afnemende hoeveelheden antigenen in de verschillende putjes. Daarom neemt de dikte van de precipitine-lijnen af ​​naarmate de antigeenconcentraties afnemen.

ii. Kwantificering van antilichaam:

Een procedure vergelijkbaar met de kwantificering van antigeen wordt gebruikt, behalve dat de positie van antigeen en antilichaam worden veranderd. Het antigeen wordt in de centrale put geplaatst en antilichaam in verschillende verdunningen wordt in de buitenste putjes geplaatst.

Enkele radiale immunodiffusie:

Mancini introduceerde deze nieuwe techniek voor het nauwkeurig kwantificeren van antigenen. Het antilichaam wordt gemengd met gesmolten agar en in een petrischaal gegoten. Na het stollen van de agar worden de putjes gesneden en gevuld met verschillende concentraties antigeen (Fig. 27, 4).

Het antigeen diffundeert uit de put en vormt het antigeen-antilichaamcomplexprecipitaat in 48-72 uur. Het neerslag wordt gezien als een witte cirkelvormige lijn rond elke put. De diameter van de cirkelvormige ring is rechtevenredig met de antigeenconcentratie (dwz meer de antigeenconcentratie, de diameter van het neerslag is meer).

Een standaardcurve kan worden geplot op een grafiekblad door de bekende antigeenconcentraties in de X-as en de diameters in de Y-as uit te zetten. Het testantigeen, waarvan de concentratie onbekend is, kan worden bepaald door interpolatie van de standaardkromme met de diameter van het precipitaat gevormd door het testantigeen.

De gevoeligheid van deze methode is 1-3 μg / ml antigeen. Deze methode wordt gebruikt om de concentraties van IgG, IgM of IgA te kwantificeren (door respectievelijk in de agar anti-IgG, anti-IgM of anti-IgA antisera op te nemen).