Verschillende klinische onderzoeken en behandelingen voor verdachte immunodeficiëntieziekten

Verschillende klinische onderzoeken en behandelingen voor verdachte immunodeficiëntieziekten!

Vermindering van lymfocytenaantallen (lymfopenie) bij jonge zuigelingen rechtvaardigt snel onderzoek naar immunodeficiëntie.

Normale pasgeborenen en jonge kinderen hebben een hoger aantal lymfocyten dan oudere kinderen en volwassenen. Normale of verhoogde aantallen lymfocyten bij baby's en jonge kinderen sluiten echter de mogelijkheid van primaire immunodeficiëntieziekten niet uit omdat de reactie van graft-versus-host (GVH) mogelijk niet voor alle patiënten duidelijk is.

A. Evaluatie van een vermoedelijke patiënt met immunodeficiëntie begint met de volgende onderzoeken:

ik. Hemoglobine, gemiddelde celhemoglobine (MCH), gemiddelde hemoglobineconcentratie in cellen (MCHC)

ii. RBC-nummer. Hematocriet (HCT), gemiddeld celvolume (MCV), aantal reticulocyten.

iii. Totaal WBC-nummer. Totaal aantal lymfocyten: de meeste SCID-patiënten met thymus hypoplasie hebben aanhoudend lage niveaus van lymfocyten. Een normale lymfocytentelling sluit SCID echter niet uit. Bovendien kan lymfopenie secundair zijn aan virale infecties, ondervoeding, celverlies, auto-immuunziekten en myelopathieën.

iv. Aantal leukocyten (neutrofielen, lymfocyten, eosinofielen, basofielen en monocytenpercentages)

v. Absoluut aantal neutrofielen, basofielen, eosinofielen, monocyten en lymfocyten.

vi. Erythrocyte bezinkingssnelheid (ESR)

vii. Aantal bloedplaatjes

viii. Natrium-, kalium-, calcium-, chloride- en glucosespiegels.

ix. Perifeer bloeduitstrijkonderzoek

Verdere beoordeling van de immunologische competentie kan worden uitgevoerd door de volgende onderzoeken.

B. Immunoglobulinen en antilichamen:

Serumniveaus van immunoglobulinen:

Serumniveaus van IgG, IgM, IgA, IgE en IgD worden kwantitatief gemeten door gebruik te maken van radiale immunodiffusie, geautomatiseerde immunoturbidometrie, radio-immunoassay of ELISA-technieken. Serumimmunoglobulineconcentraties variëren met leeftijd en omgeving. Daarom moeten geschikte regionale en etnische leeftijdsgerelateerde en seksegerelateerde normen worden gebruikt.

Concentraties van immunoglobulinen kunnen niet worden gebruikt als het enige criterium voor de diagnose van primaire immunodeficiëntie. Lage niveaus van immunoglobulinen kunnen ook het gevolg zijn van afname van de synthese of als gevolg van verlies van immunoglobulinen. Een indirecte indicatie van verlies kan worden verkregen door serumalbumine te meten, dat gewoonlijk gelijktijdig verdwijnt (bijv. Via gastro-intestinale of renale kanalen).

Normale waarden voor immunoglobulinesubklassen zijn beschikbaar. Maar de reeksen bij normale kinderen zijn erg breed en worden beïnvloed door genetische en geografische variaties.

Immuno-elektroforese en immunofixatie zijn nuttig bij de detectie van M-componenten.

Natuurlijke antilichamen tegen de bloedgroep A- en B-antigenen:

Natuurlijke antilichamen tegen de bloedgroep A- en B-antigenen worden soms onderzocht als een maat voor het vermogen van de patiënt om IgM-antilichamen tegen koolhydraatantigenen te produceren.

Specifieke antilichaamproductie na immunisatie:

Normale bereiken van IgG-antilichamen bij kinderen na immunisaties zijn beschikbaar. Maar zorgvuldige interpretatie is vereist.

Levende vaccins (zoals oraal poliovaccin, BCG, mazelen, rodehond en bof) mogen nooit worden toegediend wanneer wordt vermoed dat er sprake is van primaire immunodeficiëntie. De levende vaccins mogen ook niet aan andere familieleden worden gegeven.

ik. Niet-geïmmuniseerd kind:

een. Difterie / tetanus (DT) of Hib (Haemophilus influenzae type b) conjugaatvaccins kunnen in aanbevolen doses aan de patiënt worden toegediend. Bloed wordt 3 weken na de laatste immunisatie genomen en IgG-antilichamen tegen de geïnjecteerde antigenen worden gemeten met behulp van de ELISA-techniek.

Een Schick-test kan worden uitgevoerd voor difterie-antilichamen.

b. Drie doses gedood poliomyelitisvaccin (1, 0 ml intramusculair met tussenpozen van 2 weken) kunnen ook worden gebruikt. Twee weken na de laatste injectie wordt bloed gecontroleerd op specifieke antilichamen door middel van een virusneutralisatiemethode.

ii. Kind al geïmmuniseerd met DPT- of DT- of Hib-conjugaatvaccin:

een. Serum-IgG-antilichamen tegen difterie, tetanus, pertusis en Haemophilus influenzae type b worden gemeten. Als de antilichaamtiters laag zijn, wordt één booster-injectie gegeven en later worden de antilichaamniveaus gemeten.

Schick-test kan ook worden uitgevoerd om antilichaam tegen difterie te detecteren.

Aanvullende actieve immunisaties die kunnen worden gebruikt:

ik. IgG-antilichaamreacties tegen zuiver koolhydraatantigenen:

Pneumococcus polysaccharide / meningococcus polysaccharide / Haemophilus influenzae type b polysaccharide (vrij van dragereiwitten) / tyfus VI-antigenen kunnen worden geïnjecteerd en serum IgG-antilichamen tegen de geïnjecteerde antigenen worden gemeten uit de bloedmonsters die 3 weken na de injectie zijn genomen. (Deze polysacchariden en andere zuivere polysaccharide-antigenen zijn niet bruikbaar bij kinderen jonger dan 2. Leeftijd Verder is de interpretatie van de resultaten bij kinderen jonger dan 5 jaar moeilijk, omdat de leeftijd waarop de respons zich ontwikkelt varieert van 2-4 jaar.)

ii. Hepatitis A-vaccin

iii. Hepatitis B-vaccin is geen betrouwbaar antigeen voor het testen van de immunocompetentie. Omdat er een hoge frequentie van non-responders in de populatie is, vooral bij patiënten ouder dan 40 jaar.

C. B-lymfocyt Nummer:

Flowcytometrie met behulp van fluorescent-gemerkte CD19 en CD20 monoklonale antilichamen worden gebruikt om het aantal B-cellen te tellen. Immunocytologische methode kan worden gebruikt om het percentage B-cellen in volbloedfilm te tellen.

Pre-B-cellen in het beenmergaspiraat worden geïdentificeerd met gezuiverde met fluorochroom gemerkte antilichamen om cytoplasmatische μ zware ketens in C019 ⁺ -cellen te detecteren.

D. T-lymfocyt Nummer:

Flowcytometer met behulp van fluorescent-gelabelde monoklonale antilichamen tegen CD3 wordt gebruikt om het totale aantal T-cellen te tellen. Fluorescent-gelabelde CD4- en CDS-monoklonale antilichamen worden respectievelijk gebruikt voor het opsommen van helper-T-cellen en cytotoxische T-cellen.

Bij vermoedelijke hyper IgM immunodeficiëntie worden T-cellen eerst geactiveerd door PMA en inomycine en vervolgens geanalyseerd op expressie van CD40-ligand (CD40L) op hun oppervlak.

In vitro stimulatie van lymfocyten:

Lymfocyten kunnen in vitro worden geactiveerd door de volgende middelen:

ik. mitogenen:

Phytohemagglutinin (PHA), Pokeweed mitogen (PWM), Concanavalin (Con A).

ii. antigenen:

PPD, Candida, streptokinase, tetanustoxoïde en difterietoxoïd.

iii. Allogene cellen.

iv. Antilichamen tegen T-cel-oppervlakte-moleculen die betrokken zijn bij signaaltransductie zoals CDS, CD2, CD28 en CD43.

Na activering kunnen de geactiveerde lymfocyten op de volgende manieren worden gedetecteerd:

1. Detectie van expressie van activatie-maricers:

Geactiveerde T-cellen brengen CD69, IL-2-receptor a (CD25), transferrine-receptor (CD71) en MHC klasse II-moleculen tot expressie (rustende T-cellen brengen of brengen slechts weinig MHC klasse II-moleculen tot expressie). 1-2 dagen na stimulatie van T-cellen met een mitogeen (zoals PHA), worden de cellen onderzocht met behulp van flowcytometer met behulp van fluorescerend gemerkte monoklonale antilichamen tegen CD25-, CD71- of MHC-klasse II-moleculen.

2. Detectie van biastogene respons in geactiveerde T-cellen:

De mononucleaire cellen worden gestimuleerd met een mitogeen en vervolgens wordt 3H of 14C-gelabeld thymidine aan de kweek toegevoegd. 16 - 24 uur later worden de cellen geprecipiteerd en wordt de hoeveelheid radio-nucleotidemateriaal die in de cellen is opgenomen geteld in de vloeistofscintillatieteller. Het aantal radio-nucleotiden wordt gebruikt als een maat voor T-celactivering.

3. Gemengde lymfocytenreactie (MLC).

4. Kwantificering van IL-2 uitgescheiden door geactiveerde T-cellen:

Perifere mononucleaire cellen in het bloed worden gestimuleerd met een mitogeen in een in vitro celkweeksysteem. Het supernatant wordt vervolgens verzameld en de hoeveelheid IL-2 in het supernatant wordt gekwantificeerd met behulp van de ELISA-methode of de opname van 3H-thymidine door IL-2-afhankelijke gekweekte T-cellijnen van muizen (bijv. CTLL2).

F. Huidtesten:

Bof, trichophyton, gezuiverd eiwitderivaat (PPD), Candida, tetanustoxoïde en difterie-toxoïde zijn de antigenen die in het algemeen worden gebruikt om een ​​vertraagde type overgevoeligheidsreactie (DTH) in de huid teweeg te brengen. Om defecte CMI-respons te beoordelen, moeten verschillende antigenen worden getest. 0, 1 ml van elk antigeen wordt intradermaal geïnjecteerd en de maximale induratiediameter wordt 48-72 uur na injectie gemeten.

Een positieve DTH-respons is informatief. Bovendien wordt de DTH-respons beïnvloed door leeftijd, steroïde therapie, ernstige ziekte en recente immunisaties. Maar negatieve DTH-reacties zijn moeilijk te interpreteren (vooral bij zuigelingen en jonge kinderen) omdat ze mogelijk niet eerder zijn blootgesteld (dwz gesensibiliseerd) voor de geteste antigenen.

G. NK-cellen:

Fluorescent-gemerkte monoklonale antilichamen tegen CD16, CD56 en CD57 worden gebruikt in een flowcytometer om het aantal NK-cellen te tellen. NK-celfunctionele activiteit kan worden bepaald door een cytotoxiciteitstest tegen cellijnen zoals K562.

H. Totaal hemolytische aanvulling:

Totaal hemolytisch complement en individuele complementcomponenten van klassieke en alternatieve complement-routes.

I. Fagocytische functies:

ik. Nitro-blauw tetrazolium kleurstof reductietest

ii. Meting van O ₂ -radicale vorming na stimulatie van bloedcellen met behulp van PMA of dichloor-fluor.

iii. Kwantificering van het vermogen van de fagocyten om stafylokokken of paracolobacilli in te nemen en te doden.

iv. De integriteit van de ontstekingsreactie kan worden getest met de huidvenstertechniek van Rebuk.

v. Meting van chemotaxis, chemokinen en het vermogen om geselecteerde inflammatoire cytokinen te produceren en af ​​te geven.

vi. Beoordeling van de expressie van adhesiemoleculen (bijv. CD18).

J. Bone Marrow Aspiration of Bone Marrow Biopsy:

Beenmergaspiratie wordt gebruikt voor de identificatie van plasmacellen en pre-B-cellen. Beenmergbiopsie of aspiratie wordt ook gebruikt om andere ziekten uit te sluiten en om obscure infecties te diagnosticeren.

K. Lymph Node Biopsy:

Lymfeklierbiopsie is niet noodzakelijk voor de diagnose van de meeste immunodeficiëntieziekten. Toch kan het nuttig zijn. Snel vergrote lymfeklieren moeten worden biopsied om een ​​infectie, maligniteit of folliculaire hyperplasie te vinden. Maar biopsie van de lymfklier is mogelijk gevaarlijk bij SCID-patiënten omdat ze langzaam genezen en als portaal kunnen dienen voor het binnenkomen van microben in de patiënt.

L Rectale en intestinale biopsie:

Bij patiënten met gemeenschappelijke variabele immunodeficiëntie en selectieve IgA-deficiënties kunnen onderzoeken van rectumweefsel voor plasmacellen en lymfoïde cellen nuttig zijn. Lymfoïde cellen worden gevonden in rectale en intestinale biopsieën bij normale zuigelingen ouder dan 15-20 dagen. Jejunale biopsie kan villiuze atrofie vertonen en kan Giardia lamblia en Cryptosporidium-infecties aantonen.

M. Skin Biopsy:

Huidbiopsie is nuttig om een ​​diagnose van GVH-reactie vast te stellen bij patiënten met immunodeficiëntie na bloedtransfusie, beenmergtransplantatie, foetale weefseltransplantatie. Huidbiopsie is ook nuttig om de GVH-reactie te bepalen als gevolg van de overdracht van lymfocyten in de baarmoeder van de moeder naar de foetus tijdens de zwangerschap.

N. Thymus Biopsie:

Thymus-biopsie wordt alleen uitgevoerd wanneer vermoed wordt dat thymoom bestaat.

Chimerisme (voorkomen bij een individu van twee genetisch verschillende cellijnen):

Wanneer een persoon cellen (zoals WBC's) van een ander genetisch ander individu ontvangt, heeft de ontvanger twee genetisch verschillende celtypen (één celtype van de ontvanger zelf en de ander van de donor) en wordt dit chimerisme genoemd. Tijdens de zwangerschap kunnen maternale lymfocyten in de foetale bloedsomloop terechtkomen en daarom wordt gezegd dat het chimerisme congenitaal chimerisme is.

Door bloedtransfusie / beenmergtransplantatie / foetale weefseltransplantatie worden de cellen van een ander genetisch ander individu geïntroduceerd in de patiënt en wordt van het chimerisme gezegd dat het verworven chimerisme is. De aanwezigheid en oorsprong van lymfoïde chimere cellen kan worden vastgesteld door karyotypering / HL A typering / andere antigeentypering en analyse van sterk polymorfe markers.

O. Speciale onderzoeken:

ik. Adenosine deaminase (ADA) en purine nucleoside fosfatase (PNP) enzymniveaus moeten worden bepaald bij alle patiënten waarvan wordt vermoed dat ze SCID- en T-cel-deficiënties hebben.

ii. Serum alfa-fetoproteïne niveau kan nuttig zijn bij het scheiden van patiënten met ataxie-telangiectasie van patiënten met andere neurologische aandoeningen. Het serum alfa-fetoproteïne niveau is verhoogd (40-2000 mg / L) bij ten minste 95 procent van de patiënten met ataxie-telangiectasie.

iii. De mononucleaire cellen in het bloed van SCID-patiënten moeten worden onderzocht op de aanwezigheid van MHC klasse II-moleculen (om de mogelijkheid van MHC klasse II-deficiëntie uit te sluiten).

iv. Cytogene analyse is nuttig bij de diagnose van ataxia-telangiectasie en ander chromosomaal breeksyndroom.

v. Moleculaire cytogenetische studies zijn nuttig bij de diagnose van het DiGeorge-syndroom en zijn informatief in andere omstandigheden.

vi. Analyse van het gen op moleculair niveau en demonstratie van de genproducten.

P. Isolatie en identificatie van de besmettelijke stoffen:

Bij patiënten met immunodeficiëntie heeft de diagnose van virale infecties door antilichaambepaling weinig of geen waarde omdat hun antilichaamproductie zelf defect is. Vandaar isolatie en identificatie van het virus is essentieel. Directe virale isolatie door middel van virale kweekmethoden of PCR-methode om het virusgenoom te identificeren is vereist. CSF-culturen zijn essentieel in gevallen waarin een infectie van het centrale zenuwstelsel wordt vermoed. Bronchiale lavage kan nuttig zijn bij de diagnose van Pnumocystis carinii en andere respiratoire pathogenen. De HIV-infectie moet worden uitgesloten door Western-blot en PCR-tests voor HIV.

Q. Prenatale diagnose (di diagnose vóór de geboorte van een kind):

Prenatale diagnose kan worden gesteld van foetaal bloedmonster, amnioncellen en chorionvillusbiopsie.

ik. De afwezigheid van T- of B-cellen in navelstrengbloed van de foetus kan worden gebruikt voor de prenatale diagnose van respectievelijk SCID en X-gekoppelde agammaglobulinemie. Waar mogelijk moet prenatale diagnose gepaard gaan met moleculaire testen.

ii. Afwezigheid van celmembraancomponenten zoals MHC klasse II-moleculen en CD18 op foetale bloedcellen kan respectievelijk MHC klasse II-deficiëntie en leukocytadhesietekort type 1 identificeren.

iii. ADA-deficiëntie en PNP-deficiëntie bij de foetus kunnen worden gediagnosticeerd uit chorionische villi of foetale bloedmonsters.

R. Genetic Carrier Detection:

Recente ontwikkelingen in de precieze kartering van de verschillende immunodeficiëntieziekten en de beschikbaarheid van sterk polymorfe markers helpen bij de detectie van de drager en de prenatale diagnose.

ik. Waar de locatie van het gen redelijkerwijs is geïdentificeerd, kunnen polymorfe markers, met redelijke zekerheid, dragers identificeren in informatieve families.

ii. Als specifiek enzym- of complementcomponentdeficiëntie wordt geïdentificeerd, kunnen heterogene dragers in de familie worden vastgesteld op basis van verlaagd niveau van het enzym of de betreffende complementcomponent.