Klinisch gebruik van Flow Cytometer
Klinisch gebruik van Flow Cytometer!
1. Opsomming van verschillende cellen (zoals T-cellen en B-cellen).
2. Detectie van B-celantigenen en classificatie van hematopoëtische maligniteiten (leukemieën en lymfomen).
3. Detectie van antigenen op het oppervlak van myeloïde cellen, wat nuttig is bij de diagnose van myelodysplastische syndromen en myeloïde leukemie.
4. CD34-moleculen worden tot expressie gebracht op het oppervlak van hematopoietische stam-progenitorcellen. Stamcellen geïsoleerd uit beenmerg of perifeer bloed worden opgesomd door gelabelde mAbs te gebruiken voor CD34, zodat het exacte aantal stamcellen kan worden berekend en aan een patiënt kan worden getransfuseerd. De overblijvende stamcellen worden opgeslagen in vloeibare stikstof en kunnen later, indien nodig, naar dezelfde patiënt worden overgebracht.
5. HLA-fenotypering Met fluorchroom gemerkte mAbs voor elke HLA-antigenen worden gebruikt om te binden aan MHC klasse I- en klasse II-antigenen op het oppervlak van cellen. De gekleurde cellen worden vervolgens geanalyseerd (terwijl de cellen als een enkele kolom passeren) in de flowcytometer.
6. Detectie van intracellulaire antigenen
De cellen worden eerst behandeld met middelen die de cel permeabel maken, zonder de cel volledig te verbreken.
↓
Daarna worden de cellen behandeld met milde conserveringsmiddelen om de cytoplasmatische eiwitten op hun plaats te verknopen en te voorkomen dat ze uit de cel lekken.
↓
Vervolgens worden de cellen behandeld met gelabelde mAbs die zijn gericht tegen intracellulaire antigenen. De gemerkte mAbs gaan de cellen binnen en binden aan de intracellulaire antigenen.
↓
De cellen worden door de stroomcytometer gevoerd om de gekleurde cellen te beoordelen.
ik. Detectie van intracellulaire terminale deoxynucleotide transferase (TdT) helpt om vroege B-cel maligniteiten te definiëren. TdT is een enzym dat tot expressie wordt gebracht tijdens de herschikking van immunoglobuline-genen die verantwoordelijk is voor de toevoeging van willekeurige nucleotiden aan de overgangen van immunoglobulinesegmenten. Vandaar dat expressie van TdT in een kwaadaardige B-celpopulatie een zeer onvolgroeid B-cel fenotype aangeeft.
ii. Detectie van intracellulair myeloperoxidase helpt bij de classificatie van verschillende subtypes van myeloïde leukemie.
7. Analyse van het DNA-gehalte van cellen. Flowcytometer kan de hoeveelheid genetisch materiaal in een cel beoordelen en de S-fase fractie of de hoeveelheid aneuploïdie bepalen in een populatie van cellen, a. DNA ploidy Normale cellen die twee kopieën van chromosomen bevatten, worden diploïde cellen genoemd.
Alle cellen (behalve ovum en sperma) die niet diploïde zijn, worden als aneuploïde beschouwd en kunnen als een betrouwbare indicator voor neoplasie dienen. Een groot aantal cellen in een tumor heeft een afwijkende hoeveelheid DNA. Flowcytometrische DNA-analyse wordt uitgevoerd door incubatie van gepermeabiliseerde cellen met fluorescente kleurstoffen (zoals propidiumjodide).
De kleurstof intercaleert in DNA en fluoresceert. De hoeveelheid fluorescentie is rechtevenredig met het DNA-gehalte van de cel. De effectiviteit van chemotherapie voor maligniteit bij een patiënt kan worden beoordeeld door ploïdie-analyse. Ploïdie-analyse bepaalt de totale hoeveelheid nucleair DNA in individuele tumorcellen. De DNA-index is de verhouding van DNA-fluorescentie van tumorcellen tot de DNA-fluorescentie van normale cellen. De DNA-index van normale diploïde cellen is 1. DNA-index van meer of minder dan 1 geeft een aneuploïde tumor aan.
b. DNA-celcyclusanalyse:
Het DNA-gehalte van cellen in verschillende celcyclusfasen tijdens replicatie (dwz Gq / Gj fase-pre DNA-synthesefase; S fase-DNA-synthese; G2 / M fase-post-DNA-synthesefase) kan worden gemeten om celgroei en kanker agressiviteit. Meer DNA wordt gesynthetiseerd door agressieve kankercellen. Cellen die door de S-fase gaan, vertonen DNA-synthese die recht evenredig is met hun agressiviteit.
8. Veel leukocyt functionele testen kunnen worden uitgevoerd met flowcytometer.
ik. Productie van O 2 - (superoxide) als een test voor chronische granulomateuze ziekte.
9. Detectie van cellevensvatbaarheid:
De kleurstof propidiumjodide komt terecht in cellen met gebroken membranen en een verstoorde nucleaire structuur. Daarom zullen bij propidiumjodide dode cellen fluoresceren, terwijl de levende cellen niet fluoresceren. Bovendien bevindt de fluorescentie van propidiumjodide zich in het verste rode gedeelte van het spectrum. Daarom kan deze methode worden gecombineerd met reguliere mAb-kleuring, waarbij de dode cellen rood worden gekleurd en derhalve uit de gegevensanalyse kunnen worden weggelaten.
10. Flowcytometrische methoden om cellen te detecteren die apoptose ondergaan zijn ook beschikbaar.
