2 Type elektroforese methoden van Serum Proteïnen (met figuur)

Het serum heeft een aantal eiwitten. In 1937 introduceerde Arne W Tiselius de methode van scheiding van de verschillende eiwitten in een elektrisch veld.

Bij elektroforese worden de eiwitten gescheiden in een elektrisch veld. Later werd zone-elektroforese in papier of celluloseacetaat ontwikkeld. In 1952 werd een tweestaps methode ontwikkeld die elektroforese combineerde met immunodiffusie. Naderhand introduceerden C Williams, P Graber en M Poulik de klassieke methode van immunochelektroforese (waarbij zowel elektroforese als dubbele immunodiffusie op dezelfde agarcoate slide worden uitgevoerd).

1. Zone-elektroforese:

Eiwitten kunnen worden gescheiden op basis van hun elektrische lading op het oppervlak. Voor de scheiding wordt een inert dragermedium zoals papier, celluloseacetaat of agar gebruikt. Het serummonster wordt op het ondersteunende medium geplaatst. Het ondersteuningsmedium wordt vervolgens verbonden met de positieve en negatieve polen van de elektroforese-inrichting. Onder het elektrische veld worden de eiwitten geladen en bewegen ze over het ondersteunende medium. Hun beweging hangt af van hun elektrische lading.

Omdat verschillende eiwitmoleculen verschillende ladingen hebben, verplaatsen ze zich naar verschillende posities in het ondersteunende medium. Gewoonlijk wordt elektroforese gedurende 60 - 120 minuten of langer uitgevoerd. Vervolgens worden de eiwitten gekleurd en visueel onderzocht of gescand in een densitometer. Densitometer scanning van de gescheiden en gekleurde eiwitfracties converteert elke band in een patroon in zijn karakteristieke piek en helpt bij het kwantificeren van elke eiwitfractie.

2. Serumproteïne-elektroforese:

Normaal menselijk serum wordt gescheiden in vijf belangrijke elektroforetische banden: albumine, al-globuline, a2-globuline, ß-globuline en y-globuline (Fig. 27.5).

Zone-elektroforese is nuttig bij de diagnose van bepaalde ziekten bij de mens:

27.5A tot C:

Elektroforese op celluloseacetaatstrip en densitometer-scanning van celluloseacetaatpapierstrip: A en A1: Normale serumeiwitbanden op cellulaire acetaatstrook worden zichtbaar na kleuring (A) en densitometerschaling uit celluloseacetaatstrip (Al).

B en B1: Hypergammaglobulinemie

C en C1: Hypogammaglobulinemie

ik. Multipel myeloom en macro-globulinemie van Waldenström. Bij deze ziekten treedt gewoonlijk een elektroforetisch beperkte eiwitpiek op in het y-globuline-gebied. De piek vertegenwoordigt een accumulatie van een monoklonaal immunoglobuline. De monoklonale immunoglobulinen hebben een gedefinieerde oppervlaktelading en derhalve wordt een piek geproduceerd (terwijl het normale patroon van polyklonale immunoglobulinen een uitstrijkje in het y-globuline-gebied produceert).

ii. Hypogammaglobulinemie (duidelijke afname van het serum-gamma-globuline).

iii. Hypoproteïnemie (duidelijke vermindering van alle serumeiwitten).

iv. hypoalbuminemie:

Vermindering van albumine, die optreedt bij veel lever- en nieraandoeningen.

v. Elektroforese van urine helpt bij de detectie van vrije immunoglobuline lichte ketens, zoals Bence-Jones-eiwit.

vi. Zone-elektroforese van cerebrospinale vloeistof (CSF) helpt bij de diagnose van multiple sclerose en andere stoornissen van het centrale zenuwstelsel. Serumeiwitelektroforese wordt beschouwd als een screeningstest voor detectie van eiwitabnormaliteiten. Verdere analyse is vereist om de specifieke afwijkingen te vinden.