2 Methoden van elektro-immunodiffusie technieken voor antigeen en antilichaam
Bij immunodiffusietechnieken laat men het antigeen en het antilichaam diffunderen om een precipitinelijn te vormen en dit duurt langer (24-72 uur).
Als de beweging van antigeen en / of antilichaam sneller wordt gemaakt, zal de precipitine-lijn zich in een zeer korte tijd vormen, zodat de diagnose snel kan worden gesteld. Dit doel wordt bereikt door het antigeen en antilichaam elektrisch te verplaatsen. Er zijn veel variaties op dit principe. De twee gebruikelijke methoden die worden gebruikt, zijn tegenstroom immuno-elektroforese en Laurell's raketelektroforese.
Tegenstroomimmuno-elektroforese (eendimensionale dubbele elektro-immunodiffusie):
Twee putjes worden gesneden in de agar op een dia.
↓
Eén putje is gevuld met antigeen en de andere put is gevuld met antilichaam.
↓
De antilichaamzijde van de agar is verbonden met de anode en de antigeenkant is verbonden met de kathode van de elektroforese-inrichting.
↓
Bij toepassing van elektriciteit bewegen de antigeen- en antilichaammoleculen (vanwege hun elektrische ladingen) in de agar onder elektrische invloed.
In een alkalische buffer zijn de meeste van de klinisch belangrijke antigenen elektronegatief en vandaar dat ze zich verplaatsen naar de anode (dat wil zeggen naar de bron van het antilichaam). De antilichaammoleculen zijn elektrisch neutraal of zwak negatief. Normaal zouden de elektrisch negatieve antilichaammoleculen naar de anode moeten bewegen.
Maar de beweging van de hydroneum-ionen in de agar tijdens elektroforese is zeer sterk en trekt de zwak negatieve antilichaammoleculen naar de kathode (dwz naar de antigeenput). Omdat antigeen- en antilichaammoleculen in tegengestelde richting bewegen, ontmoeten ze elkaar en vormen ze een neerslaglijn tussen de twee putten. De precipitine lijn is zichtbaar in 30 minuten (in tegenstelling tot 24 uur in diffusie) en is ongeveer 10 keer gevoeliger dan diffusie.
Tegenstroomimmuun-elektroforese wordt gebruikt om te detecteren
een. Meningokokken, cryptococale en hemofiele antigenen in het hersenvocht en
b. Hepatitis B-oppervlakte-antigeen in het serum.
Lauren's Rocket Electrophoresis (eendimensionale enkele elektroimmunodiffusie):
Deze techniek wordt gebruikt om antigenen te kwantificeren. Het antilichaam wordt gemengd met gesmolten agar en op glasplaat gegoten. Na stolling worden putjes gesneden en gevuld met verschillende concentraties antigeen.
↓
Wanneer elektriciteit wordt toegepast, wordt het antigeen in de agar bevattende antilichamen gedreven. Precipitinelijnen worden gevormd langs de laterale randen van de bewegende grens van antigeen. Geleidelijk aan wordt het antigeen verloren door precipitatie, zodat de concentratie ervan aan de leidende rand afneemt en de laterale marges convergeren om een scherp punt te vormen. Het resulterende patroon van neerslag lijkt dus op een spike of raket.
De afstand van de piek uit de antigeenput neemt toe met toename in antigeenconcentratie. Een standaardcurve kan worden vastgesteld door bekende concentraties van antigenen te gebruiken. De concentratie van een testantigeen kan worden bepaald door interpolatie van de standaardkromme met de afstand van de gevormde raket.
De gevoeligheid van deze techniek is ongeveer 0, 5 mg / ml. Laurell-techniek wordt ook gebruikt om antigenen van cryptococcus, meningococcus en hemophilus in cerebrospinale vloeistof (CSF) te detecteren.
