Studienota's over de doorstroomcytometrie
Het onderstaande artikel biedt studie-aantekeningen over doorstromingcytometrie.
Flowcytometrie is de recente techniek die gedurende de laatste twee decennia is ontwikkeld om de celinhoud te bestuderen, in het bijzonder de efficiëntie van de nucleaire verpakking. Naast NPE, konden de fysische en chemische kenmerken van de inhoud van de verschillende cellen en pathologische aandoeningen snel worden geanalyseerd met de juiste conclusie.
De flowcytometers zijn op de markt verkrijgbaar in de vorm van een machine. De machine bestaat uit een vloeistofsysteem, een optisch systeem om lichtsignalen te verzamelen die worden gegenereerd als cellen die door de laser gaan. De machine is ook voorzien van een elektronisch systeem dat de lichtsignalen omzet in proportionele elektronische signalen die uiteindelijk worden gedigitaliseerd voor computeranalyse.
Ongeveer 5000 cellen per seconde, die afzonderlijk na elkaar kunnen worden gemeten, van de suspensie van heterogene populatie kunnen worden gescand.
Het geavanceerde Fludics-systeem is voorzien van lasers, optica, elektronica en sortering. Het Fludics-systeem heeft Fluorescentie-geactiveerde celsorteerder (FACS Calibur-vloeistofsysteem), tijdens het sorteren kan het de nauwkeurigheid van het aantal cellen sorteren.
Het resultaat is hoge zuiverheid met herstel dat valt tussen Single cell en Recovery. Het heeft elektronisch bediend met drie knoppen om de werkingsmodus PRIME, STAND BY en RUN te selecteren. De snelheid zijn controles als Hoog; (60 ul / min.), Medium (35 ul / min) en Laag (12 ul / min).
De excitatie en emissie, fluorochromen, filters en kleurcompensatie vormen het belangrijkste onderdeel van de apparatuur. 530/30 BP-filter meet signalen die worden geëmitteerd door fluorescentieisothiocyanaat (vlek). Als Phycoerythrin en Popidium Iodide worden gebruikt, wordt het 585/42-BP-filter gebruikt. 650 LP-filters worden gebruikt als Peridinin Chlorophyll en 7-Amino-Actinomycin D Signal worden gegenereerd.
De lasersignalen worden gelezen door de quest software van Becton Dickinson. Fluorescerende detector en bandfilters moeten worden aangepast volgens de instructie en het vereiste van het instrument. 488 nm Argonlaserlichtbronnen en 623 nm banddoorlaatfilter zijn vaak aanwezig in apparatuur.
Het heeft ook een systeem om gegevens en analyse weer te geven. De belangrijke parameters zijn histogrammen, multi-parameter data en lijstmodus data en gating. De machine-analyse van de gegevens met behulp van de meegeleverde software en geef histogrammen van het DNA-gehalte versus aantal die automatisch op de computer worden weergegeven (49.2).
De toepassingen van flowcytometer zijn talrijk en een zegen voor biologisch onderzoek en voor klinisch onderzoek bij veel menselijke ziekten. Flowcytometer wordt gebruikt voor de studie van bloedlijnen in het hemopoitische weefsel in de kopniercellen van ademende vissen.
Het kan gemakkelijk zijn onderscheid te maken tussen de pluripotente hematopoëtische stamcel en het fenotype van de volwassen functionele perifere lymfocytenpopulatie. Het significante gebruik van deze apparatuur is het bestuderen van de apoptose of celdood en ook het bestuderen van de necrose van cellen als gevolg van toxiciteit voor pesticiden.
Vanwege breedhoekverstrooiingssignalen is het mogelijk om lymfocyten, monocyten en granulocyten op te lossen uit gelyseerd volbloedspecimen. Het is ook mogelijk om bloedplaatjes te scheiden van de achtergrondruis. Het wordt gebruikt voor het immuunsysteem en bij immunofenotypering. Het wordt gebruikt om de leukemie en lymfoom, transplantatieonderzoek, reticulocytentelling en analyse van cellulaire DNA-inhoud te bestuderen.
Vanwege het pulsverwerkingsmechanisme is het voordelig bij DNA-celcyclusanalyse. NPE-analyse wordt gebruikt voor het differentiëren van primaire borstkanker en metastase, primaire colonkanker en dikke darmuitzaaiingen, alsook maag- en eierstokkanker (figuur 49.2).
Het gebruikte protocol is dat de eerste cellen werden verwijderd en gefixeerd in 3% paraformaldehyde. Ze zijn gepermeabiliseerd met 0, 5% Triton x 100. Het nucleaire DNA werd vervolgens gemerkt met popidiumjodide na RNase-behandeling met behulp van cyclus Test Plus DNA-kit.
