Fluorescent in situ hybridisatie (FISH)

In dit artikel zullen we het hebben over Fluorescent in Situ Hybridization (FISH).

Het is een laboratoriumtechniek die wordt gebruikt om te bepalen hoeveel exemplaren van het specifieke DNA-segment in een cel aanwezig zijn. Het identificeert een specifiek chromosomaal gebied in cytologische preparaten. In het labo wordt een DNA-segment chemisch gemodificeerd of gekleurd met fluorescerende kleurstof en bij onderzoek onder fluorescentiemicroscoop ziet het er heel fel gekleurd fluorescerend uit.

Fluorescentie in situ hybridisatie heeft de gevoeligheid, specificiteit en resolutie van chromosoomanalyse sterk verhoogd.

De voordelen van deze techniek zijn talrijk, maar sommige worden als volgt vermeld:

(1) De resolutie van deze methode is veel beter dan die van traditionele chromosoombanden en ongeveer 2 mega-basen (Mb) in lengte.

(2) Het protocol van deze techniek is eenvoudig en is toepasbaar voor zowel delende cellen als niet-delende cellen. Deze techniek kan een reeks mutaties identificeren, waaronder deletie, duplicatie, aneuploïdie en aanwezigheid van afgeleide chromosomen. Deze techniek wordt ook vaak gebruikt om terugkerende of restziekten bij beenmergtransplantatiepatiënten te controleren.

FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) wordt meestal uitgevoerd op gestimuleerd perifeer bloed voor zowel chromosomale analyse als de identificatie van specifieke translocatie en deletie. Het wordt bijvoorbeeld gebruikt om Philadelphia-chromosoom (Ph ¹ ) te demonstreren, gevormd door de translocatie tussen chromosoom 9 en 22 en veroorzaakt een chronische myelogene leukemie (CML).

Het wordt ook gebruikt bij de identificatie van de translocatie tussen chromosoom 8 en 14 die het Burkitt-lymfoom veroorzaakt en tussen chromosoom 18 en 14 dat resulteert in B-celleukemie. Het wordt ook gebruikt voor de diagnose van het downsyndroom.

In de FISH-procedure kunnen celculturen worden bereid. De metafase / prometafase-chromosomen worden op een glasplaat gefixeerd. Bovendien kan FISH worden gewijzigd voor analyse van interfase-kernen. Vervolgens worden de chromosomen gedenatureerd; een gelabelde DNA-probe wordt vervolgens geïntroduceerd en vervolgens wordt probe gehybridiseerd met het chromosoom op de slide. Daarom wordt de term 'in situ' hybridisatie gegeven.

De DNA-sondes zijn gelabeld met fluorochroom, een dergelijke sonde geeft een fluorescerend signaal en kon worden gezien met fluorescentiemicroscopie. De fluorescentie kon worden afgetrokken met behulp van filters bevestigd in de fluorescentiemicroscoop.

FISH-sondes hebben een lengte van ongeveer 40 kilo basen (kb) en worden gedetecteerd als een dubbel fluorescerend signaal op elk lid van een chromosoompaar. De dubbele punt komt overeen met de signalen van elk van de twee uitgelijnde zusterchromatiden.

In zijn eenvoudige toepassing zou een normaal FISH-patroon voor een dergelijke probe twee sets van dubbele stippen zijn, één set voor elk lid van de normaal gepaarde chromosomen. Deze dubbele stippen fuseren vaak om één signaal te vormen. Cellen die monosomisch zijn voor het betreffende chromosomale gebied zouden slechts één enkele set dubbele punt per nucleus vertonen, terwijl trisomische cellen drie sets van dubbele stippen zouden tonen.