Klinische relevantie van Coomb's Test (Antiglobulinetest)
Coombs 'test is een eenvoudige en ingenieuze techniek. Coombs 'test werd voor het eerst beschreven in 1908 door Moreschi en werd later herontdekt door RR Coombs en collega's in 1945 om niet-agglutinerende antilichamen tegen de rode bloedcelantigenen aan te tonen.
(De antilichamen worden 'niet-agglutinerende' antilichamen genoemd omdat de antilichamen geen agglutinatie kunnen veroorzaken, ondanks hun binding met de antigenen aan RBC's. De antilichamen worden soms ook 'incomplete antilichamen' genoemd omdat de antilichamen niet veroorzaken agglutinatie, maar er is geen onvolledigheid in de structuur van de antilichaammolecule.)
De niet-agglutinerende antilichamen binden in feite aan de antigenen op het oppervlak van RBC's. Maar de verwachte agglutinatie van RBC's komt niet voor. Wanneer een ander antilichaam (genaamd anti-antilichaam of antiglobuline) tegen het RBC-gebonden antilichaam wordt toegevoegd, treedt agglutinatie op. De anti-antilichamen binden aan de Fc-gebieden van RBC-gebonden antilichamen en vormen een rooster, dat leidt tot de agglutinatie. De test wordt antiglobulinetest of Coombs-test genoemd.
Er zijn twee soorten anti-globulinetests:
1. Directe anti-globuline-test (DAT)
2. Indirecte anti-globuline-test (lAT)
1. Directe anti-globuline-test (DAT) wordt gebruikt om antilichaam te detecteren, dat in vivo aan RBC's is gebonden.
Gewassen RBC's van een patiënt worden gemengd met anti-globuline.
↓
De anti-globulines binden aan niet-agglutinerende antilichamen op het oppervlak van RBC's en veroorzaken zichtbare agglutinatie. Het testresultaat is DAT-positief (Fig. 16.6).
Daarom suggereert een positieve DAT dat de RBC's van de patiënt gecoat zijn met niet-agglutinerende antilichamen en dat de patiënt DAT-positief is.
ik. Positieve DAT komt voor bij RBC's van pasgeborenen met hemolytische ziekte van pasgeborenen (de RBC's van HDN zijn bedekt met anti-Rh antilichamen).
ii. Momenteel wordt DAT gebruikt voor het detecteren van IgG-antilichamen en C3b gebonden aan het oppervlak van RBC's. Bij patiënten die zich presenteren met hemolyse, is de DAT-test bruikbaar om te bepalen of de hemolyse van immuun-etiologie is of niet.
Fig. 16.6: Coomb's directe agglutinatietest (DAT).
DAT wordt gebruikt om de aanwezigheid van niet-agglutinerende antilichamen gebonden op het oppervlak van RBC's te detecteren. A. De gewassen RBC's van het individu worden gemengd met het anti-globuline-reagens. De anti-globulinen binden aan de Fc-gebieden van de RBC-gebonden antilichamen en veroorzaken zichtbare agglutinatie, en het individu zou DAT-positief zijn. B. Als de rode bloedcellen niet zijn bekleed met antilichamen, zal er geen sprake zijn van agglutinatie en wordt van het individu gezegd dat het DAT-negatief is. DAT wordt ook gebruikt voor het detecteren van de aanwezigheid van anti-Rh antilichaam gecoate RBC's van pasgeborenen waarvan vermoed wordt dat ze lijden aan hemolytische ziekte van de pasgeborene
ik. Niet-immune oorzaken van hemolyse [zoals gedissemineerde intravasculaire coagulatie, enzymdeficiënties van rode cellen [zoals glucose-6-fosfaatdehydrogenasedeficiëntie (G6PD-deficiëntie), defecten van rode-celmembraan (zoals erfelijke sferocytose, PNH) en hemoglobinopathieën (zoals sikkelcelanemie, thalassemie)] zijn DAT-negatief.
ii. Immuunoorzaken van hemolyse (zoals auto-immune hemolytische anemie, door drugs geïnduceerde hemolyse, hemolytische transfusiereacties) zijn DAT-positief.
iii. Een positieve DAT vanwege C3 alleen wordt gezien bij patiënten met koude auto-antilichamen, paroxismale koude hemoglobinurea en in sommige gevallen van door geneesmiddelen geïnduceerde hemolytische anemieën.
2. Indirecte agglutinatietest (IAT) wordt gebruikt om de aanwezigheid van niet-gebonden antilichamen tegen rode bloedcellen in het serum van een patiënt te detecteren.
ik. IAT voor het detecteren van anti-Rh-antilichamen in het serum van de moeder:
Moeders serum wordt geïncubeerd met Rh-positieve O-bloedgroep-RBC's. Als er anti-Rh-antilichamen in het serum van de moeder aanwezig zijn, zullen de antilichamen binden aan de rode bloedcellen. De RBC's worden vervolgens gewassen.
↓
Vervolgens wordt het anti-globuline-reagens toegevoegd.
↓
Als anti-Rh-antilichamen in het serum van de moeder aanwezig zijn, zouden de rode bloedcellen geagglutineerd zijn en is de test positief voor IAT.
ii. IAT om tijdens bloedtransfusie antilichamen in het serum van een ontvanger tegen de donor-RBC's te detecteren:
De IAT-test wordt veel gebruikt (vóór bloedtransfusie) bij het kruis-matchen van donor-RBC's met het serum van de ontvanger om de aanwezigheid van antilichamen in de ontvanger te detecteren, die kunnen reageren met de RBC's van de donor.
Was de rode bloedcellen van de donor.
↓
Voeg het serum van de ontvanger toe aan de rode bloedcellen en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 ° C.
↓
Was de RBC's.
↓
Voeg het anti-globuline-reagens toe.
Ontwikkeling van agglutinatie geeft aan dat het serum van de ontvanger antilichamen tegen de donor-RBC's heeft en de test als positief voor antilichamen wordt gerapporteerd. Een positief IAT-resultaat geeft aan dat het voorgestelde donorbloed niet mag worden getransfuseerd naar de ontvanger in kwestie.
De huidige anti-globuline-testreagentia (ook wel Coombs 'reagens) -preparaten bevatten een' cocktail 'van monoklonale antilichamen gericht tegen menselijk IgG en C3b (binding van niet-agglutinerende antilichamen tegen RBC's activeren het complementsysteem, wat resulteert in de depositie van C3b-fragmenten over de RBC's, en daarom zijn de RBC's behalve antilichamen ook gecoat met C3b-fragmenten).
