29 Equipment's Every Microbiology Laboratory Should Have

Probeer het werkingsprincipe en de werking van apparatuur te bestuderen die worden gebruikt in het Microbiology Laboratory. Een modern microbiologisch laboratorium moet worden uitgerust met de volgende apparatuur.

1. Hete luchtoven voor sterilisatie:

Het wordt gebruikt voor de sterilisatie van glaswerk, zoals reageerbuizen, pipetten en petrischalen. Een dergelijke droge sterilisatie wordt alleen gedaan voor glaswerk. Vloeibare stoffen, zoals bereide media en zoutoplossing, kunnen niet in de oven worden gesteriliseerd, omdat ze water verliezen door verdamping.

De glaswerk worden gesteriliseerd bij 180 ° C gedurende 3 uur. Een oven (figuur 3.2) heeft een thermostaatregeling, waarmee de vereiste constante temperatuur met vallen en opstaan ​​kan worden verkregen. De aflezing van de thermostaatknop is een schatting en de exacte temperatuur wordt afgelezen door een thermometer in de oven of op een ingebouwde L-vormige thermometer te plaatsen.

In een moderne oven (figuur 3.3) is er een digitaal temperatuurdisplay en een automatische temperatuurregelaar om eenvoudig de gewenste temperatuur in te stellen. De tijd wordt ingesteld door een digitale timer. Na het laden van de glaswerk wordt de deur gesloten en de oven ingeschakeld.

De gewenste temperatuur is ingesteld. Nadat de oven de ingestelde temperatuur heeft bereikt, wordt de vereiste sterilisatietijd ingesteld op de timer. De oven schakelt na de ingestelde tijd automatisch uit. De oven wordt geopend, pas nadat de temperatuur dicht bij kamertemperatuur is gedaald. Anders, als de deur wordt geopend, terwijl de binnenkant van de oven nog steeds erg heet is, kan er koude lucht binnenstromen en de glaswerk barsten.

2. Droogoven:

Voor de bereiding van bepaalde reagentia moeten de glazen na zorgvuldig reinigen en spoelen met gedestilleerd water worden gedroogd. Ze worden gedroogd in de droogoven bij 100 ° C tot het glaswerk volledig opdroogt.

3. Autoclaaf:

Autoclaaf is de kern van een microbiologisch laboratorium. Het wordt niet alleen gebruikt voor het steriliseren van vloeibare stoffen zoals bereide media en zoutoplossing (verdunners), maar ook voor het steriliseren van glaswerk, indien nodig.

Het heeft hetzelfde werkingsprincipe als een binnenlandse snelkookpan. De maximale temperatuur die kan worden verkregen door kokend water in een open vat is 100 ° C (kookpunt van water).

Deze temperatuur is voldoende om alleen de niet-sporenvormende formeerders te doden, maar het is moeilijk om de sporenvormende bacteriën bij deze temperatuur te doden, omdat ze ontsnappen door hittebestendige sporen te vormen. Het duurt erg lang om de sporen bij deze temperatuur te doden.

Aan de andere kant, als water wordt gekookt in een gesloten houder, vanwege de verhoogde druk erin, stijgt het kookpunt en kan een stoomtemperatuur van veel meer dan 100 ° C worden verkregen. Deze hoge temperatuur is nodig om alle bacteriën te doden, inclusief de hittebestendige sporenvormers. Stoomtemperatuur neemt toe met verhoging van de stoomdruk (tabel 3.1).

Tabel 3.1: Temperaturen haalbaar bij verschillende stoomdrukken:

Bij het gebruik van een standaard verticale autoclaaf (Figuur 3.4) wordt er voldoende water in gegoten. Als water te weinig is, wordt de bodem van de autoclaaf tijdens het verwarmen gedroogd en wordt deze door verdere verhitting beschadigd.

Als het ingebouwde waterverwarmingselement (Figuur 3.5) waterniveau boven het element moet worden gehandhaafd. Aan de andere kant, als er te veel water is, duurt het lang om de gewenste temperatuur te bereiken.

De te steriliseren materialen zijn bedekt met handgeschept papier en gerangschikt op een aluminium- of houten frame op de bodem van de autoclaaf. Als de materialen half verzonken blijven of drijvend zijn, tuimelen ze tijdens het koken en kan water binnendringen. De autoclaaf is perfect luchtdicht gesloten en houdt de stoomafvoerklep open.

Vervolgens wordt het verwarmd boven de vlam of door het ingebouwde verwarmingselement. Lucht in de autoclaaf moet volledig door deze klep kunnen ontsnappen. Wanneer wordt waargenomen dat waterdamp door de klep ontsnapt, is deze gesloten.

Temperatuur en druk binnen blijven toenemen. De druktoename wordt waargenomen op de drukregelaar. Gewoonlijk wordt sterilisatie uitgevoerd bij 121 ° C (een druk van 15 pond per vierkante inch dwz 15 psi) gedurende 15 minuten. De vereiste tijd wordt beschouwd vanaf het moment dat de vereiste temperatuur wordt bereikt.

Zodra de vereiste temperatuur-druk is bereikt, wordt deze onderhouden door de verwarmingsbron te regelen. Na de aangegeven tijd (15 minuten) wordt het verwarmen onderbroken en de stoomaflaatklep enigszins geopend. Als deze onmiddellijk volledig geopend zijn, kunnen er vloeistoffen uit de containers komen door plotselinge drukval.

Geleidelijk wordt de stoomafgifte steeds meer geopend, zodat alle stoom kan ontsnappen. De autoclaaf wordt pas geopend nadat de druk weer is gedaald tot normale atmosferische druk (0 psi). De autoclaaf mag nooit worden geopend als er nog steeds druk in zit. De hete gesteriliseerde materialen worden verwijderd door ze vast te houden met een stuk schone doek of met asbest beklede handschoenen.

In het geval van een met stoom omhulde horizontale autoclaaf, produceert een ketel de stoom (figuur 3.6). Het wordt vrijgegeven bij een aangewezen druk, in de buitenkamer (jas). Lucht kan ontsnappen en vervolgens is de stoomafvoerklep gesloten.

Het hete omhulsel verwarmt de binnenkamer, waardoor de te steriliseren materialen worden verwarmd. Dit voorkomt condensatie van stoom op de materialen. Nu komt er stoom onder druk uit de mantel in de binnenkamer en kan er lucht uit ontsnappen.

Daarna is de stoomafvoerklep gesloten. De stoom onder druk in de binnenkamer bereikt temperaturen van meer dan 100 ° C, die de materialen die erin worden bewaard kan steriliseren. De autoclaaf heeft ook een automatisch sluitend systeem, dwz tenzij de temperatuur en de druk naar beneden komen in de buurt van de kameromstandigheden, kan de deur niet worden geopend.

Naast de drukregelaar, heeft deze ook een aparte temperatuurregelaar om de temperatuur in de binnenkamer aan te geven. Bovendien handhaaft de autoclaaf de temperatuur en druk automatisch en schakelt uit na de ingestelde tijd van sterilisatie.

4. Microbiologische incubator:

Groeiende microben worden in het laboratorium verkregen door ze bij geschikte temperaturen te laten groeien. Dit wordt gedaan door de gewenste microbe in een geschikt kweekmedium te inoculeren en vervolgens bij de optimale temperatuur voor de groei ervan te incuberen.

Incubatie gebeurt in een incubator (Figuur 3.7), die een constante temperatuur behoudt die specifiek geschikt is voor de groei van een specifieke microbe. Aangezien de meeste microben die pathogeen zijn voor de mens, rijkelijk groeien bij lichaamstemperatuur van de normale mens (dwz 37 ° C), is de gebruikelijke incubatietemperatuur 37 ° C.

De incubator heeft een thermostaat, die een constante temperatuur aanhoudt, ingesteld op basis van de behoefte. De temperatuurwaarde op de thermostaat is bij benadering. Nauwkeurige temperatuur is te zien op de thermometer op de couveuse. De exacte temperatuur, per eis, wordt ingesteld door de thermostaatknop met vallen en opstaan ​​te draaien en de temperatuur op de thermometer te noteren.

De meeste van de moderne incubators (figuur 3.8) zijn programmeerbaar, waarvoor geen proef- en fouttemperatuurinstelling nodig is. Hier stelt de operator de gewenste temperatuur en de gewenste tijdsperiode in.

De incubator onderhoudt het automatisch overeenkomstig. Vocht wordt geleverd door een beker water in de incubator te plaatsen tijdens de groeiperiode. Een vochtige omgeving vertraagt ​​de uitdroging van de media en vermijdt daardoor onechte experimentele resultaten.

5. BOD-incubator (incubator met lage temperatuur):

Sommige microben worden voor specifieke doeleinden bij lagere temperaturen gekweekt. De BOD-incubator met lage temperatuur (Figuur 3.9), die temperaturen van 50 ° C tot zo laag als 2-3 ° C kan handhaven, wordt in dergelijke gevallen voor incubatie gebruikt.

De constante gewenste temperatuur wordt ingesteld door aan de knop van de thermostaat te draaien. Rotatie van de thermostaatknop verplaatst een naald op een wijzerplaat die de temperatuur bij benadering aangeeft. De exact vereiste temperatuur wordt verkregen door de knop fijn te draaien met vallen en opstaan ​​en de temperatuur op de thermometer op de incubator te noteren.

De meeste moderne BOD-incubatoren (figuur 3.10) zijn programmeerbaar, waarvoor geen proef- en fouttemperatuurinstelling vereist is. Hier stelt de operator de gewenste temperatuur en de gewenste tijdsperiode in. De incubator onderhoudt het automatisch overeenkomstig.

6. Koelkast (koelkast):

Het dient als een opslagplaats voor thermolabiele chemicaliën, oplossingen, antibiotica, serums en biochemische reagentia bij lagere temperaturen en zelfs bij temperaturen onder het vriespunt (bij minder dan 0 ° C). Voorraadculturen van bacteriën worden er ook in opgeslagen tussen subcultuurperioden. Het wordt ook gebruikt voor de opslag van gesteriliseerde media, om hun uitdroging te voorkomen.

7. Diepe koelkast:

Het wordt gebruikt voor het opslaan van chemicaliën en het bewaren van monsters bij zeer lage temperaturen onder nul.

8. Elektronisch toppan-saldo:

Het wordt gebruikt voor het wegen van grote hoeveelheden media en andere chemicaliën, waar nauwkeurig wegen niet van groot belang is.

9. Elektronisch analytisch saldo:

Het wordt gebruikt om kleine hoeveelheden chemicaliën en monsters nauwkeurig en snel te wegen.

10. Dubbele analytische balans:

Het wordt gebruikt om chemicaliën en monsters nauwkeurig te wegen. Wegen kost meer tijd, waarvoor het alleen in noodgevallen wordt gebruikt.

11. Gedestilleerd waterplant:

Water wordt gebruikt bij de bereiding van media en reagentia. Als de media worden bereid met kraanwater, kunnen de chemische onzuiverheden die daarin aanwezig zijn de groei van de micro-organismen in de media beïnvloeden. Bovendien, hoe hoger het gehalte aan bacteriën in de media, hoe langer de tijd is die nodig is voor hun sterilisatie en hoe groter de overlevingskans van sommige bacteriën.

Gedistilleerd water, hoewel niet bacterievrij, bevat minder bacteriën. Dat is de reden; het heeft de voorkeur bij de bereiding van microbiologische media. Het wordt ook gebruikt bij de bereiding van reagentia, omdat de chemische onzuiverheden in leidingwater de goede werking van de reagenschemicaliën kunnen verstoren.

Omdat de productie van gedestilleerd water door Liebig-condensor een tijdrovend proces is, wordt het in de meeste laboratoria bereid door 'gedestilleerde waterplanten'. Gewoonlijk is een gedistilleerde waterinstallatie gemaakt van staal of messing. Het wordt ook nog steeds gedestilleerd water genoemd.

Het heeft een inlaat die moet worden aangesloten op de waterkraan en twee uitgangen, één voor gedestilleerd water om in een container te vallen en de andere voor het uitstromen van heet koelwater in de gootsteen. De stil is op de muur geïnstalleerd. Het wordt verwarmd door ingebouwde elektrische verwarmingselementen (verwarmingselement).

Het werkt nog steeds efficiënt, wanneer de waterinvoer zo wordt afgesteld dat de temperatuur van het koelwater dat uit de stal in de gootsteen stroomt niet te hoog noch te laag is, dwz warm water moet eruit lopen. Het gedestilleerde water kan sporen van metalen bevatten die zijn gecorrodeerd uit de stalen of messing houder.

Om metaalvrij gedestilleerd water te verkrijgen, wordt een glasdestillatie-apparaat gebruikt en nog steeds is het een kwartsdestillatie-inrichting. Voor een microbiologisch laboratorium is een destillatieapparaat van staal of glas echter voldoende. Voor precisieanalyses wordt dubbel of driemaal gedestilleerd water gebruikt.

12. Ultrapuur waterzuiveringssysteem:

Voor precisie-analytische werken, tegenwoordig, in plaats van het gebruik van dubbel of drievoudig gedestilleerd water, wordt micro-gefilterd water gebruikt. In het geval van gedestilleerd water bestaat de kans dat weinig vluchtige stoffen in het water vervluchtigen tijdens het verwarmen van het water en vervolgens gecondenseerd worden in het verzamelde gedestilleerde water.

Er kunnen dus sporen van dergelijke stoffen in het gedestilleerde water zijn. Om dit te ondervangen, wordt ultrazuiver water gebruikt. Hier laat men water door zeer fijne microscopisch kleine poriën gaan, die het microscopische zwevende deeltje inclusief de microben behouden.

Vervolgens passeert het water twee kolommen van ionenuitwisselingsharsen. De anionenuitwisselingshars adsorbeert de bijschriften die in het water aanwezig zijn, terwijl de caption-uitwisselingshars de anionen adsorbeert. Het water dat eruit komt is extreem puur.

13. Homogenisator:

Voor microbiologische analyse worden vloeibare monsters direct gebruikt, terwijl vaste monsters grondig moeten worden gemengd met een verdunningsmiddel (meestal fysiologische zoutoplossing), om een ​​homogene suspensie van bacteriën te verkrijgen. Er wordt aangenomen dat deze suspensie homogeen bacteriën bevat.

Het mengen van vaste monsters en verdunningsmiddelen gebeurt door een homogenisator, waarbij een motor een rotor met scherpe bladen met hoge snelheid roteert in de gesloten homogenisatorbeker die het monster en de verdunningsmiddelen bevat. Het heeft een snelheidsregelaar voor het regelen van de rotatiesnelheid van de waaier.

In sommige laboratoria wordt het mengen handmatig gedaan met gesteriliseerde stamper en vijzel. In moderne laboratoria wordt een wegwerpzak gebruikt, waarbinnen het vaste monster en vloeibare verdunningsmiddelen aseptisch worden gezet en mechanisch worden gemengd door peristaltische werking van een machine op de zak. Deze machine wordt stomacher genoemd.

14. pH-meter:

Een pH-meter is een instrument voor het bepalen van de pH van vloeibare media, vloeibare monsters en buffers. Het heeft een glazen pH-elektrode. Wanneer het niet wordt gebruikt, moet het half worden ondergedompeld in water in een klein bekerglas en bij voorkeur worden afgedekt door een stolp om stofophoping in het water en verlies van water door verdamping te voorkomen.

Voor gebruik wordt de meter gekalibreerd met behulp van twee standaardbuffers met een bekende pH. Gewoonlijk zijn buffers met pH 4, 0, 7, 0 en 9, 2 in de handel verkrijgbaar. Het instrument wordt ingeschakeld en gedurende 30 minuten ingeschakeld om op te warmen. De temperatuurkalibratieknop wordt gedraaid naar de temperatuur van de oplossingen waarvan de pH de gemeten is.

Vervolgens wordt de elektrode in de buffer (pH 7, 0) gedompeld. Als de waarde niet 7, 00 is, wordt de pH-kalibratieknop geroteerd totdat de waarde 7, 00 is. Vervolgens wordt de elektrode gedompeld in een andere buffer (pH 4, 0 of 9, 2).

Als de meting hetzelfde is als de pH van de gebruikte buffer, werkt het instrument goed. Anders wordt de elektrode geactiveerd door gedurende 24 uur in 0, 1 N HC1 te dopen. Na kalibratie wordt de pH van de monsters bepaald door de elektrode erin te dompelen en de meting op te merken.

Telkens voordat u in een oplossing dompelt, moet u de elektrode uitspoelen met gedistilleerd water. De monsters mogen geen gesuspendeerde kleverige materialen bevatten, die een coating op de tip van de elektrode kunnen vormen en de gevoeligheid ervan kunnen verminderen.

De oude pH-meters van het model hebben dubbele elektroden (een daarvan werkt als referentie-elektrode), terwijl nieuwe modellen een gecombineerde elektrode hebben. Om het probleem van de temperatuurcorrectie op te lossen, zijn er nu ook pH-meters met automatische temperatuurcorrectie beschikbaar.

Hier wordt ook een andere 'temperatuurelektrode' in de oplossing gebracht samen met de pH-elektrode, die de temperatuur van de oplossing meet en automatisch de invloed van temperatuurvariaties corrigeert.

Geavanceerde pH-meters hebben een enkele gelelektrode. Dergelijke elektroden hebben zeer weinig kans op breuk, omdat ze bijna volledig zijn ingesloten in een hard plastic omhulsel behalve aan de punt. De punt heeft zowel pH- als temperatuursensoren.

Bovendien zijn ze gemakkelijk te onderhouden, omdat ze niet constant onderdompelen in gedestilleerd water, omdat de elektrodetop wordt afgesloten met een plastic dop die een verzadigde oplossing van kaliumchloride bevat, wanneer deze niet in gebruik is. Bij de bereiding van microbiologische media wordt de pH echter bepaald door papier met een klein bereik en wordt deze op de vereiste pH ingesteld door zonodig zuren of logen toe te voegen.

15. Warmhoudplaat:

Hete plaat wordt gebruikt om chemicaliën en reagentia te verhitten. De hete plaat bestaat uit een ijzeren plaat, die van onderen wordt verwarmd door een elektrisch verwarmingselement. De vereiste mate van verwarming wordt verkregen door een regulator.

16. Schudwaterbad:

Soms is verwarming op zeer precieze temperaturen vereist. Dergelijke precieze temperaturen kunnen niet worden verkregen in een incubator of oven, waarin de temperatuur fluctueert, hoewel enigszins. Precieze temperaturen kunnen echter worden gehandhaafd in een waterbad, dat zorgt voor een stabiele temperatuur.

Een waterbad bestaat uit een container met water, die wordt verwarmd door elektrische verwarmingselementen. De vereiste watertemperatuur wordt verkregen door de verwarmingssnelheid te verhogen of te verlagen door de thermostaat met vallen en opstaan ​​te verdraaien.

In een schudwaterbad wordt de substantie op de gewenste temperatuur verwarmd en tegelijkertijd voortdurend geschud. Schudden wordt gedaan door een motor, die roteert en de containers heen en weer beweegt in elke rotatie. De mate van schudden wordt opnieuw geregeld door een regulator. Schudden schudt de substantie en verhoogt de snelheid van het proces.

De meeste moderne waterbaden zijn programmeerbaar en hebben geen proef- en fouttemperatuurinstelling nodig. Een gewenste watertemperatuur kan worden gehandhaafd gedurende een gewenste tijdsperiode door dienovereenkomstig te programmeren. Het wordt gebruikt voor het kweken van bacteriën in bouillonmedium bij een specifieke temperatuur.

17. Quebec Colony Counter:

In opsomming van bacteriën in monsters wordt aangenomen dat een enkele bacterie aanleiding geeft tot een enkele zichtbare kolonie, wanneer gekweekt op een plaat van gestold voedingsmedium. Dus, door het aantal kolonies te tellen, kan het aantal bacteriën in een monster worden geschat.

Soms zijn kolonies erg klein en te druk, waardoor het moeilijk is om te tellen. Tellen wordt gemakkelijk, wanneer een mechanische handenteller, de Quebec Colony Counter (figuur 3.11), wordt gebruikt. Het verdeelt de plaat in verschillende vierkante delen en de kolonies worden 1, 5 keer vergroot met een vergrootglas, wat het tellen gemakkelijk maakt.

18. Elektronische kolonieteller:

Elektronische kolonie teller is van twee soorten:

(1) Elektronische telpost in de hand en

(2) Elektronische kolonie-teller op tafelblad.

De in de hand gehouden elektronische kolonieteller is een kolonie-teller in pen-stijl met een viltstift inkten. Voor het tellen van kolonies van bacteriën gekweekt in een petrischaal, wordt het in een omgekeerde positie gehouden, zodat de kolonies zichtbaar zijn door het bodemoppervlak van de petrischaal.

De kolonies worden gemarkeerd door het glasoppervlak van de petrischaal aan te raken met de viltpunt van de kolonieteller. Aldus wordt elke kolonie gemarkeerd door een punt gemaakt door de inkt van de viltstift op het bodemoppervlak van de petrischaal. In een enkele beweging tellen de tegencijfers van de elektronische kolonie mee en worden bevestigd met een piepgeluid.

Het cumulatieve aantal kolonies wordt weergegeven op een viercijferig LED-display. In het geval van een elektronische kolonieteller op tafel wordt de petrischaal met de bacteriekolonies op een verlicht podium geplaatst en de telbalk wordt ingedrukt. Het precieze aantal kolonies wordt onmiddellijk weergegeven op een digitale uitlezing.

19. Magneetroerder:

Bij de bereiding van oplossingen moeten bepaalde chemicaliën geruime tijd roeren, worden opgelost in bepaalde oplosmiddelen. Magnetische roerder wordt gebruikt om dergelijke stoffen gemakkelijk en snel op te lossen. Een kleine met teflon gecoate magneet, 'roerstaaf' genoemd, wordt in een houder geplaatst die het oplosmiddel en de opgeloste stof bevat.

Vervolgens wordt de container op het platform van de magnetische roerder geplaatst, waaronder een magneet met hoge snelheid door een motor roteert. Aangetrokken door de roterende magneet, roteert de teflon-gecoate magneet in de container en roert de inhoud. Nu lost de opgeloste stof snel op.

De teflon-coating voorkomt dat de magneet reageert met de oplossing die ermee in contact komt. Na volledige oplossing wordt de met teflon gecoate magneet uit de oplossing verwijderd met behulp van een lange retriever, genaamd 'stirring bar retriever'.

20. Sonicator:

Het wordt gebruikt om cellen te scheuren met behulp van hoogfrequente golven.

21. Vortex Mixer:

Het is een instrument dat wordt gebruikt voor het grondig mengen van vloeistoffen in reageerbuizen. Het heeft een rotor, waarvan de snelheid kan worden gecontroleerd. Op de punt van de rotor zit een schuimrubberen top. Wanneer de bodem van een reageerbuis op deze schuimrubbertop wordt gedrukt, begint de rotor te roteren, waardoor de bodem van de reageerbuis met hoge snelheid wordt rondgedraaid.

Vanwege de centripetale kracht, wordt de oplossing grondig gemengd. Het is vooral nuttig tijdens seriële verdunning in opsomming van bacteriën, die homogene suspensie van bacteriecellen nodig heeft.

21. Laminar Flow Chamber:

Het is een kamer (figuur 3.12) die wordt gebruikt voor aseptische overdracht van gesteriliseerde materialen, evenals voor inoculatie van microben. Stofdeeltjes die in de lucht zweven, bevatten microben. Deze met microben beladen stofdeeltjes kunnen de gesteriliseerde media binnendringen en deze verontreinigen, wanneer ze gedurende korte tijdsperioden worden geopend tijdens inoculatie van microbe of overdracht van de ene houder naar de andere.

Om dit te ondervangen, wordt bij inoculatie in de open lucht de lucht van het kleine gebied van inoculatie gesteriliseerd door de vlam van een bunsenbrander. De verwarmde lucht wordt licht en beweegt naar boven, waardoor wordt voorkomen dat de stofdeeltjes op de media vallen tijdens het korte openingsproces.

Om de kans op besmetting door de met microben beladen lucht verder te verminderen, wordt een laminaire stromingskamer gebruikt. Het is een kubusvormige glazen kamer. Een luchtblazer blaast lucht uit de omgeving en voert deze door een HEPA-filter (High Efficiency Particulate Air-filter), om het stofvrij te maken (microbe-vrij).

Deze microbe-vrije lucht gaat laminair door de kamer en komt uit de kamer door de open voordeur. Deze laminaire stroming van microbe-vrije lucht vanuit de kamer naar buiten door de open deur voorkomt dat de buitenlucht de kamer binnenkomt.

Aldus wordt de kamer niet verontreinigd met de microben die aanwezig zijn in de buitenlucht, hoewel de deur geopend wordt gehouden tijdens inoculatie of overdracht van media. Een UV-lamp die in de kamer is aangebracht, steriliseert de kamer voor gebruik.

Het heeft een roestvrijstalen platform met voorziening voor een gaspijpleidingaansluiting voor een bunsenbrander. Voor gebruik wordt het platform gereinigd en gedesinfecteerd met lysol, wordt de bunsenbrander aangesloten en wordt de glazen deur gesloten.

Het UV-licht wordt gedurende 10 minuten ingeschakeld om de omgeving in de kamer te steriliseren en vervolgens uitgeschakeld. De glazen deur mag nooit worden geopend als het UV-licht aan is, omdat UV-licht een nadelig effect heeft op de huid en het gezichtsvermogen. De ventilator wordt ingeschakeld en vervolgens wordt de glazen deur geopend.

Nu wordt de bunsenbrander aangestoken en wordt mediaoverdracht of inoculatie in de kamer aseptisch uitgevoerd. Als uiterst gevaarlijke microben moeten worden gehanteerd, wordt een laminaire stromingskamer gebruikt met handschoenen die vanuit de glazen voordeur in de kamer uitsteken, omdat inoculatie moet worden uitgevoerd door de voordeur gesloten te houden.

22. Elektronische celteller:

Het wordt gebruikt om het aantal bacteriën in een bepaald vloeistofmonster direct te tellen. Een voorbeeld van een elektronische celteller is de 'Coulter-teller'. In deze uitrusting laat men een suspensie van bacteriecellen door een opening van een minuut passeren, waarover een elektrische stroom vloeit.

De weerstand bij de opening wordt elektronisch geregistreerd. Wanneer een cel de opening passeert en niet-geleider is, verhoogt deze de weerstand tijdelijk. Het aantal keren dat de weerstand tijdelijk toeneemt, wordt elektronisch geregistreerd, wat aangeeft hoeveel bacteriën er in het vloeibare monster aanwezig zijn.

23. Membraanfiltratieapparaat:

Bepaalde stoffen zoals ureum vallen uiteen en verliezen hun oorspronkelijke eigenschappen als ze door hitte worden gesteriliseerd. Dergelijke stoffen worden gesteriliseerd door middel van membraanfiltratieapparaten. In dit apparaat wordt de oplossing van de te steriliseren substantie gefilterd door een membraanfilter, waardoor bacteriecellen niet kunnen passeren. Filtratie gebeurt onder zuigdruk om de filtratiesnelheid te verhogen (Afbeelding 2.19, pagina 30).

24. Microscopen:

Verschillende soorten microscopen worden gebruikt voor visuele waarneming van morfologie, motiliteit, kleuring en fluorescerende reacties van bacteriën.

25. Computers:

Computers worden over het algemeen gebruikt voor analyse van resultaten. Ze worden ook binnen enkele uren gebruikt om bacteriën gemakkelijk te identificeren. Anders is identificatie van bacteriën een moeizaam proces en neemt het dagen in beslag om één bacteriesoort te identificeren.

De computers die worden gebruikt voor de identificatie van bacteriën zijn Apple II, IBM PC en TRS-80 en hun moderne varianten. Elk onderzoekspersoneel van het laboratorium moet worden voorzien van een computer, samen met een internetfaciliteit.

26. Spectrofotometer:

Het is een instrument voor het meten van de verschillen in kleurintensiteiten van oplossingen. Een lichtbundel van een bepaalde golflengte wordt door de testoplossing geleid en de hoeveelheid geabsorbeerd (of doorgelaten) licht wordt elektronisch gemeten.

Een eenvoudige zichtbare spectrofotometer kan licht doorlaten met golflengten binnen zichtbaar bereik, terwijl een UV-cum-zichtbare spectrofotometer licht kan passeren met golflengten in ultraviolet alsook in zichtbaar bereik. In het microbiologische laboratorium wordt het gebruikt voor directe telling van bacteriën in suspensie en voor andere doeleinden.

27. Elektrische apparaten:

Een schommeling van de elektrische spanning in het laboratorium is een van de belangrijkste redenen, die de levensduur van de apparatuur vermindert en soms beschadigt. Daarom moeten alle spanningsgevoelige apparatuur worden voorzien van spanningsbeveiligingsinrichtingen zoals stabilisatoren, servostabilisatoren of constante spanningstransformatoren (CVT) volgens de aanbevelingen van de fabrikanten van de apparatuur.

Computers, balansen en sommige geavanceerde apparatuur moeten worden aangesloten via een ononderbroken stroomtoevoer (UPS), omdat elk defect aan de elektrische voeding tijdens hun werking sommige van hun gevoelige componenten ernstig kan beschadigen.

Het laboratorium moet een generator met hoge capaciteit hebben om in geval van stroomuitval elektrische stroom naar het hele laboratorium te leveren. Dit komt omdat stroomuitval niet alleen de activiteiten van het laboratorium tot stilstand brengt, maar ook ongewenste onomkeerbare veranderingen teweegbrengt in de monsters die zijn bewaard in diep-frigges en koelkasten.

28. Automatisch identificatie-systeem voor bacteriën:

Het is een instrument dat wordt gebruikt voor automatische computergestuurde identificatie van bacteriën (figuren 3.13 en 3.14). De conventionele methode voor identificatie van bacteriën is erg lang en omslachtig.

Het betreft voornamelijk kleuring, motiliteitstest, culturele kenmerken, een reeks biochemische tests en uiteindelijk het doorzoeken van de naam van de bacteriën in 'Bergey's Manual of Determinative Bacteriology' door de resultaten te vergelijken met die in de handleiding. Het automatische bacteriënidentificatiesysteem identificeert de bacteriën automatisch in zeer korte tijd.

Het systeem, zoals VITEK 2 (figuur 3.14) gebruikt wegwerpkaarten. Eén kaart is vereist voor de identificatie van één bacterie. Het systeem kan een reeks kaarten bevatten, die op een cassette kunnen worden geplaatst, waardoor meerdere bacteriën tegelijkertijd kunnen worden geïdentificeerd.

Elke kaart heeft verschillende rijen putten. Meestal zijn er 8 rijen van elk 8 wells (8X8 = 64 wells). De putjes bevatten verschillende gedehydrateerde media die nodig zijn voor verschillende biochemische tests. Aan elke kaart is een capillaire buis bevestigd, die de suspensie van te identificeren bacteriën opzuigt en in alle putjes verdeelt.

De gedehydrateerde media in de putjes worden gehydrateerd door de suspensievloeistof, waardoor groei van de bacteriën mogelijk wordt. Na een voorgeschreven incubatietijd worden de kleurwijzigingen in alle bronnen automatisch in het systeem geregistreerd.

De resultaten van de kleurwijzigingen gaan naar een computer die op het systeem is aangesloten. De computer vergelijkt de resultaten automatisch met de resultaten in zijn bibliotheek voor verschillende bacteriën en geeft uiteindelijk de naam van de bacterie met een duidelijke waarschijnlijkheid.

Voor identificatie worden de gegeven bacteriën, gekweekt als geïsoleerde kolonie op een plaat of als zuivere kweek die op een helling is gegroeid, genomen. Een kluitje van de bacteriën wordt aseptisch overgebracht in een steriele zoutoplossing in een reageerbuis en er wordt een suspensie van de bacteriën gemaakt.

De suspensie moet een voorgeschreven dichtheid van bacteriën bevatten, zoals bepaald door een densitometer. De reageerbuis is bevestigd aan de cassette en een kaart is nabij de cassette bevestigd, zodanig dat de punt van de zuigende capillaire buis van de kaart diep ondergedompeld blijft in de suspensie.

Verschillende van dergelijke reageerbuizen en kaarten worden aan elke cassette bevestigd, afhankelijk van het aantal te identificeren bacteriën. De cassette wordt in de vacuümkamer van het systeem geplaatst. Een hoog vacuüm ontstaat in de kamer, waardoor de bacteriesuspensie in de capillaire buizen wordt gezogen en in de wells van de kaarten wordt afgegeven.

De cassette wordt uitgenomen en in de incubatie- en analysekamer geplaatst. Hier worden de capillaire buizen doorgesneden en worden de afgesneden uiteinden automatisch afgesloten. Vervolgens begint het incubatieproces bij een voorgeschreven temperatuur gedurende een voorgeschreven tijdsperiode, die wordt geprogrammeerd door het bedieningspaneel. Tijdens de incubatie, in elke 15 minuten, gaat elke kaart automatisch naar de kleurenlezer, die de kleurwijzigingen in de wells leest en deze opslaat.

De opgenomen resultaten gaan naar de computer, die ze automatisch vergelijkt met de resultaten die beschikbaar zijn in de bibliotheek voor verschillende bacteriën. Ten slotte geeft het de namen van de bacterie met duidelijke kansen. De gebruikte kaarten vallen in de afvalverwijderingskamer van het systeem voor verwijdering en definitieve verwijdering na sterilisatie.

De bekende automatische identificatiesystemen voor bacteriën zijn VITEK 2 en API. Hoewel VITEK 2 werkt op het bovenstaande principe, gebruikt het API (Analytical Profile Indexing) -systeem (Figuur 3.13) een enigszins andere methode voor de automatische identificatie van bacteriën, waarbij handmatige inenting en externe incubatie zijn vereist.

29. PCR-thermocycler, gekoelde centrifuge, ultracentrifuge, gaschromatografie (GC), hoge prestaties vloeistofchromatografie (HPLC), dunne laag chromatografie (TLC), papierchromatografie, kolomchromatografie en elektroforese-eenheid:

Dit zijn instrumenten die worden gebruikt voor isolatie, zuivering en identificatie van biochemische stoffen, zoals bacterieel DNA, plasmiden, microbiële toxinen, enzovoort. Polymerasekettingreactie (PCR) is een belangrijk hulpmiddel in op nucleïnezuur gebaseerde methoden. Het is een werkpaard in moderne laboratoria voor microbiologie en biotechnologie.